大分子抗原因其具有兩個以上的抗原決定簇,而可用雙抗體夾心法測定,小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3,T4及睪酮等激素因其只有一個抗原決定簇,從而無法使用雙抗夾心方法測定,只能采用競爭抑制法測定。具體步驟如下:
1.先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。
2.同時加入待測樣本和酶標的小分子,溫育一定時間后洗板;此步中,待測樣本的小分子將與酶標小分子競爭與固相上特異抗體結合。
3.加入酶底物,溫育顯色測定,顯色的強弱與待測樣本中的小分子含量成反比。
這種測定模式中,需要得到小分子與酶的結合物,而小分子酶結合物一則在制備上不如抗體酶結合物簡便,二則其純化亦頗為困難,結合有小分子的酶與游離酶之間難于分離。因此,有人嘗試在合成二或多聚體小分子的基礎上,建立雙抗夾心競爭ELISA方法測定小分子,測定的靈敏度和特異性均有所提高.
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