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細(xì)胞總游離膽固醇菲律賓(FILIPIN)熒光染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

來(lái)源:青島捷世康生物科技有限公司   2023年01月05日 10:54  

主要用途

 

細(xì)胞總游離膽固醇菲律賓(FILIPIN熒光染色試劑是一種旨在通過(guò)熒光染料菲律賓(FILIPIN特異性與膽固醇結(jié)合,形成復(fù)合體,并產(chǎn)生藍(lán)色熒光現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種細(xì)胞(動(dòng)物、人體等)或培養(yǎng)細(xì)胞中游離膽固醇分布的檢測(cè)。廣泛用于細(xì)胞病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,熒光清晰。

 

技術(shù)背景

 

膽固醇(cholesterol)是一類(lèi)稱(chēng)之為固醇類(lèi)(sterols)或聚類(lèi)異戊二烯(polyisoprenoid)或三萜皂甙元(triterpene)的多環(huán)化合物(polycyclic compound)。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離(free form)和脂化結(jié)合(ester)兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物組織中,主要以非脂化形式存在于細(xì)胞膜中。在膜功能和脂代謝以及激素合成中起著重要作用。菲律賓(FILIPIN)是一類(lèi)由四種同分異構(gòu)體的多烯抗生素(polyene antibiotics)或多馬霉素(polyene macrolide)的總稱(chēng)。源自于S. FILIPINENSIS細(xì)菌的培養(yǎng)液中。其分子式為C35H58O11,分子量為654.8。菲律賓與游離膽固醇結(jié)合形成聚集體或復(fù)合物。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液(Reagent A  毫升

固著液(Reagent B  毫升

抗干擾液(Reagent C  毫升

染色液(Reagent D  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent D在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存4℃冰箱里有效保證6

 

用戶(hù)自備

 

熒光顯微鏡:用于樣品染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 樣本固著處理

 

1. 準(zhǔn)備1個(gè)48孔細(xì)胞培養(yǎng)板的細(xì)胞或載波片的細(xì)胞

2. 小心抽去48孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液  

3. 小心加入xx微升清理液(Reagent A,鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面

4. 小心移去清理液(Reagent A

5. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟34二次

6. 小心加入xx微升固著液(Reagent B,鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面

7. 室溫下孵育30分鐘

8. 小心移去固著液(Reagent B

9. 小心加入xx微升清理液(Reagent A),清洗樣品表面

10. 小心移去清理液(Reagent A

11. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟910二次

二、樣本染色處理

1. 小心加入xx微升抗干擾液(Reagent C,鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面

2. 室溫下孵育10分鐘

3. 小心移去抗干擾液(Reagent C

4. 小心加入xx微升染色液(Reagent D,鋪滿(mǎn)整個(gè)樣品表面

5. 室溫下孵育30分鐘,避免光照

6. 小心移去染色液(Reagent D

7. 小心加入xx微升清理液(Reagent A),清洗樣品表面

8. 小心移去清理液(Reagent A

9. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟78二次

10. 小心加入xx微升清理液(Reagent A

11. 即刻在熒光顯微鏡下觀察:激發(fā)波長(zhǎng):340nm;散發(fā)波長(zhǎng):430nm――膽固醇陽(yáng)性呈現(xiàn)藍(lán)色熒光

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為50次(48孔細(xì)胞培養(yǎng)板)操作

2. 操作時(shí),須戴手套

3. 操作時(shí),避免污染母液

4. 試劑溶液在樣品表面時(shí),避免有氣泡存在,同時(shí)確保鋪滿(mǎn)樣品表面

5. 樣品染色完成后,即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 

6. 熒光容易受到光漂白(photobleach),建議使用抗淬滅劑12058.2

7. 本產(chǎn)品使用載玻片細(xì)胞染色后,可用于電鏡分析

8. 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應(yīng)調(diào)整處理液:

操作容器

建議處理液規(guī)格

載玻片

100微升

載玻片培養(yǎng)皿

1毫升

35mm培養(yǎng)皿

1毫升

96孔培養(yǎng)板

100微升

48孔培養(yǎng)板

200微升

24孔培養(yǎng)板

500微升

12孔培養(yǎng)板

1毫升

6孔培養(yǎng)板

2毫升

25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶

3毫升


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