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Elisa試劑盒在細胞免疫熒光中的應用

來源:研域生物技術(上海)有限公司   2023年01月03日 09:35  

Elisa試劑盒過程:

一、固定:PBS 5min×3次 振蕩洗刷制作好的細胞爬片。固定液掩蓋細胞,RT 靜置15min。PBS 5min×3次 振蕩洗刷。

二、通透化:通透液掩蓋細胞,RT 靜置30min。PBS 5min×3次 振蕩洗刷。

三、封閉:封閉液掩蓋標本表面37℃孵育1h。

四、一抗孵育:一抗以適宜濃度稀釋PBS,掩蓋標本表面。4℃孵育過夜,第二天37℃復溫1h。PBS 5min×3次 振蕩洗刷。

五、TSZ Elisa試劑盒二抗孵育:fitC符號二抗以適宜濃度稀釋于PBS,掩蓋標本表面。37℃避光孵育<60min。PBS 5min×3次 避光 振蕩洗刷。

六、染核:新鮮稀釋Hoechst掩蓋細胞表面,RT避光靜置<10min。PBS 5min×3次 避光 振蕩洗刷。

七、封片:在潔凈的載玻片上滴一滴封片劑,將爬片的細胞面扣在封片劑上。

八、鏡檢:4℃避光保存。

注:

1、細胞密度要適宜,狀態較好。

2、從孵育二抗開始要避光(封閉室內日光燈即可)。

3、完成后及時鏡檢,照相;分別用不同波長激起熒光,在Photoshop軟件下組成一張圖。

試劑制造:

1、通透液:0.5 %(v/v)TritonX-100/PBS

2、封閉液:正常山羊血清稀釋于PBS;或商品化封閉液制品。

3、Hoechst:Hoechst33258即可。

4、TSZ Elisa試劑盒封片劑:50%(v/v)甘油/PBS。

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