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大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒操作步驟

來源:上海一研生物科技有限公司   2022年12月22日 10:54  

大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒操作步驟:


1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘。

SOC Medium

2×YT肉湯 250用于基因工程菌大腸桿菌培養

2×YT Broth

TB培養基 250用于基因工程菌大腸桿菌培養,營養豐富

Terrific Broth

SB培養基 250用于基因工程菌大腸桿菌培養,營養非常豐富

Super Broth

HB-PE自誘導培養基 250用于基因工程菌大腸桿菌自誘導蛋白表達培養

HB-PET Auto Express Medium

即用型平板培養基

平板計數瓊脂平板(9cm)10個/包國際標準平板計數瓊脂,含糖,用于細菌總數的測定

Plate Count Agar

營養瓊脂平板(9cm)10個/包細菌計數、不含糖,可作血瓊脂基礎和傳代用

Nutrient Agar

血平皿(9cm)10個/包用于一般細菌的分離、培養和溶血試驗

Blood Agar Plates

哥倫比亞血瓊脂平板(9cm)10個/包用于營養要求高細菌的分離、培養和溶血試驗

Columbia Blood Agar

巧克力瓊脂平板(9cm)10個/包用于嗜血桿菌、奈瑟氏菌分離培養

Chocolate Agar

伊紅美藍瓊脂平板(9cm)10個/包弱選擇性培養基、用于分離腸道致病菌,特別是大腸桿菌

Eosin-Methylene Blue Agar

SS瓊脂平板(9cm)10個/包用于沙門氏菌、志賀氏菌的選擇性分離培養

Salmonella Shigella Agar

HE瓊脂平板(9cm)10個/包用于沙門氏菌的選擇性分離培養

Hektoen Enteric Agar


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