單細胞鋪板的常見問題解答

來源：Bio-Techne 2022年12月16日 13:37

　　單細胞鋪板是細胞實驗中常見又必須掌握的一門技術，看起來是非常簡單的一項操作，但其實卻經常會遇到：細胞分布不均勻的情況。要知道把用于實驗的細胞鋪的均勻且密度適宜，不僅看起來賞心悅目，更是決定了我們實驗的穩定性。

　　單細胞鋪板的常見問題解答：

　　1、細胞計數前后出現較大誤差？

　　考慮細胞沉降導致懸液不勻；懸液體積過大或過?。幌♂尡稊堤呋蛱偷仍蛟斐伞?/div>

　　2、如何克服細胞懸液不均勻的問題？

　　盡量將細胞吹打為單個，防止抱團，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養基中。

　　3、一般加多少細胞懸液合適？

　　由于加入計數室的量，過少會導致計數室內出現氣泡，過多則會使得計數板上的蓋玻片不緊貼計數板，使得高度變高，體積變大；計數室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。

　　4、計數時，細胞稀釋倍數如何控制？

　　若是計數室細胞過稀或過密，會造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細胞/ml。如一般10cm皿的細胞約300-500萬個，一些細胞個體小也能達到1000-2000萬，可根據所需細胞數目取出部分作稀釋或連續稀釋后計數。舉例來說可將100ul細胞懸液加入到900ul培養基中，混勻后進行計數，計數所得乘以10即為實際細胞密度。

　　5、計數的原則有哪些？

　　計數時對壓在外圈邊線的細胞遵循“計上不計下，計左不計右”的統計學原則，遇到兩個以上的細胞組成的細胞團計為一個細胞

　　6、對于某些容易聚團的細胞，該怎么辦？

　　對于容易聚團的細胞，盡管當時搖勻了，但是靜置30min后，取出后將細胞培養板后，肉眼即可見嚴重的細胞居中抱團現象，比如乳腺癌細胞MDA-MB-231。

　　對于這種細胞解決辦法：從個人經驗來看，若是時間允許的話，可以降低接種密度，可以隔一天細胞多了再進行藥物處理或者劃線等。

　　7、如何避免每個孔之間的細胞不均勻？

　　單細胞鋪板速度盡量快點，在加完半邊板后，需要再次將培養皿內剩余的細胞懸液充分混勻再繼續鋪板。

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