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探針法qPCR試劑盒的特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
探針法qPCR試劑盒的特點(diǎn)：
1、定量準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短
從探針法qPCR原理可以看出，擴(kuò)增引物和探針序列都匹配后擴(kuò)增的產(chǎn)物才能產(chǎn)生熒光信號(hào)，這樣就確保了熒光信號(hào)是目的片段的擴(kuò)增產(chǎn)生的，排除了非特異性擴(kuò)增的影響，特別是針對(duì)一些低拷貝和低濃度的樣品，檢測結(jié)果所見即所得，從而保證了檢測的準(zhǔn)確性。因探針法qPCR的高特異性，因此無需再設(shè)置熔解曲線檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性如何，有效縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
2、特異性高
在探針法qPCR中，除加入引物外還增加一條特異性探針，當(dāng)引物和探針都與靶基因結(jié)合時(shí)，擴(kuò)增時(shí)探針才會(huì)被水解酶切發(fā)出熒光。當(dāng)引物發(fā)生非特異性擴(kuò)增時(shí)，探針不會(huì)結(jié)合到非特異性片段上，因此不會(huì)被水解酶切而發(fā)出熒光，從而提高了特異性。
3、兼容多重反應(yīng)
在探針的5'端標(biāo)記不同的熒光修飾，則不同的探針在檢測過程中就會(huì)發(fā)出不同的熒光信號(hào)。根據(jù)此原理可以將檢測不同目的基因或者基因型的探針標(biāo)記不同的熒光修飾做混合檢測，這樣就可以做多重檢測，檢測對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)就是檢測對(duì)應(yīng)探針的熒光定量結(jié)果。多重檢測大大節(jié)省了檢測的物料試劑成本，也大大節(jié)省了檢測時(shí)間，進(jìn)一步提高了檢測的速度和適用性。
探針法qPCR試劑盒的實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
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