Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。
細胞凋亡屬于程序化細胞死亡,可見于各種器官和細胞,在正常發育、生理、病理過程中對細胞和器官的穩態具有十分重要的調節作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。其中Caspase-1是唯1可剪切IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前體蛋白產生20kD和10kD片斷,這兩個片斷可以形成異源二聚體,并進一步形成四聚體。此四聚體具有蛋白酶活性。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調節細胞凋亡,并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。試劑盒測定原理基于Caspase-1特異水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA (Ac-YVAD-pNA),釋放出游離的硝基苯胺pNA,后者呈黃色在405 nm具有最大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定。其吸光度值對應于Caspase-1的水解活性。反應體系100微升,試劑盒提供的試劑,除標準曲線外可進行50或100次樣品測定。
艾美捷天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性檢測試劑盒適用:測定哺乳動物組織、細胞caspase-1活性。
原理:
艾美捷天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性檢測試劑盒是無細胞毒性的,細胞膜滲透抑制劑。進入每個細胞,并不可逆地與活化的caspase-1結合。任何未結合的FAM-YVAD-FMK-FLICA試劑擴散出細胞并被沖走。因此留在細胞內的綠色熒光直接體現了活性caspase-1酶活性的。熒光結果可通過熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀進行分析。
組分:
25T:
l FLICA Caspase-1 Reagent (FAM-YVAD-FMK), 1 vial, #653 l 10X Apoptosis Wash Buffer, 15 mL, #635 l Fixative, 6 mL, #636 l Propidium Iodide, 1 mL, #638 l Hoechst 33342, 1 mL, #639 l Kit Manual
100T:
l FLICA Caspase-1 Reagent (FAM-YVAD-FMK), 4 vials, #653 l 10X Apoptosis Wash Buffer, 60 mL, #634 l Fixative, 6 mL, #636 l Propidium Iodide, 1 mL, #638 l Hoechst 33342, 1 mL, #639 l Kit Manual
保存條件:2-8°C 避光保存。
艾美捷FAM-FLICA 天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性檢測試劑盒Nature文章鑒賞:
IF=30.9, 《Escherichia coli Rho GTPase-activating toxin CNF1 mediates NLRP3 inflammasome activation via p21-activated kinases-1/2 during bacteraemia in mice》,Nature Microbiology
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