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測定蛋白質的構型和功能要用什么儀器,有哪些步驟!

來源:津鈉儀器(上海)有限公司   2022年12月02日 09:40  
   構型這個概念是指一個有機分子中各個原子*的固定的空間排列。這種排列不經過共價鍵的斷裂和重新形成是不會改變的。構型的改變往往使分子的光學活性發生變化。蛋白質的構型就是一級結構,指其氨基酸排列順序。
  測定蛋白質的構型的主要有兩種方法:Edman降解(Edman degradation)和質譜法。
  EDMAN降解法測序是經典的方法,通過從多肽鏈游離的N末端(或者C末端,但是很少)測定氨基酸殘基的序列的過程。N末端氨基酸殘基被苯異硫氰酸酯修飾,然后從多肽鏈上切下修飾的殘基,現在一般都是自動測序儀。
  質譜法測蛋白只要是利用生物質譜儀,比如ESI-Q-TOF,ESI-IT-Obitraq。利用特異的酶將蛋白切成肽段,然后通過質譜方法進行測定,產生數據或通過重頭比對,或者通過生物信息學中數據庫搜索的方法推斷出肽段序列,然后再由肽段序列拼接處蛋白序列。這種方法是近些年來隨著蛋白質組學的發展而廣泛被使用,但是對于蛋白完整序列測定需要較強的生物信息學技術。
  整體而言,EDMAN降解法準確,但是耗時長,而且對于所測定的肽段要求很高,不能太長,不能太難修飾等等,一般能測個20-50堿基不錯了。而質譜法方法快速,但是準確性比EDMAN降解法略差。
  另外,樓主講的蛋白功能測定,不同的蛋白質功能各異,蛋白功能主要通過生物學實驗反復驗證次得到,這個比較復雜,沒有固定的模式,要逐一研究。
  另外,像核磁儀可以用來研究蛋白的構象或者說晶體結構,表面等離子共振儀器可以用來研究蛋白蛋白相互作用,等等,蛋白質是未來有限的生物研究資源,現在對蛋白質的研究熱情都很高。也有許多相關的基礎科教書,樓主感興趣可以去看看。

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