科研試驗(yàn)中要使ELISA試劑盒測(cè)定得到精確的成果，不論是定性的仍是定量的，必須嚴(yán)厲按照規(guī)則的方法制備試劑和施行測(cè)定。一般性試劑，如包被緩沖液、洗刷液、標(biāo)本稀釋液、結(jié)合物稀釋液、底物工作液和酶反響終止液等，制造時(shí)不可漫不經(jīng)心。

(一)加樣 

在ELISA試劑盒中除了包被外，一般需進(jìn)行45加樣。在定性測(cè)定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的精確性，例如規(guī)則為加樣一滴。此時(shí)應(yīng)該運(yùn)用相同口徑的滴管，保持精確的加樣姿勢(shì)，使每滴液體的體積基本相同。在定量測(cè)定中則加樣量應(yīng)力求精確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)則制造。加樣時(shí)應(yīng)將液體加在孔底，防止加在孔壁上部，并注意不可出現(xiàn)氣泡。

(二)保溫 

在ELISA試劑盒中一般有二次抗原抗體反響，即加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，此時(shí)反響的溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則的要求，保溫容器是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為防止蒸騰，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該是金屬的，傳熱簡(jiǎn)單。如用保溫箱，空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其間，以平衡溫度，這在室溫較低時(shí)更為重要。參加底物后，反響的時(shí)刻和溫度通常不做嚴(yán)厲要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在試驗(yàn)臺(tái)上，以便不時(shí)調(diào)查，待對(duì)看管顯色適其時(shí)，即可終止酶反響

(三)洗刷 

洗刷在ELISA試劑盒進(jìn)程中不是反響聚，但卻是決定試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗刷的意圖是洗去反響液中沒(méi)有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反響進(jìn)程中非特異性吸附于固相載體的攪擾物質(zhì)。因此在ELISA試劑盒測(cè)定的反響進(jìn)程中應(yīng)盡量防止非特異性吸附，而在洗刷時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的攪擾物質(zhì)洗刷下來(lái)。在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗刷液中參加聚山梨酯一類(lèi)物質(zhì)即右達(dá)到此意圖。

ELISA板的洗刷一般可采用以下方法：

①吸干孔內(nèi)反響液;

②將洗刷液注滿板孔;

③放置2min，略作搖擺;

④吸干孔內(nèi)液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗刷的次數(shù)一般為3～4次，有時(shí)乃至需洗5～6次。

(四)比色 

如陰性對(duì)照色彩極淺，在定性測(cè)定中一般可采用目視比色。如用比色計(jì)測(cè)定成果，精確性決定于ELISA板底的平整與透明度和比色計(jì)的質(zhì)量。