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美國Bio-rad關(guān)于生物分子純化的一些指南

來源:廣州信譜徠科學(xué)儀器有限公司   2022年11月21日 10:22  

生物分子純化指南

 

抗體純化

單抗藥物采用 UNOsphere SUPrA 親和介質(zhì)進(jìn)行捕獲UNOsphere 離子交換中間純化最后用CHT 陶瓷羥基磷灰石進(jìn)行精純該生產(chǎn)工藝可直接得到高純度的抗體并能zui有效的去除宿主蛋白聚合體DNA 和內(nèi)毒素

Affi-Gel Affi-Prep Protein A 介質(zhì)上偶聯(lián)的Protein A 可與免疫球蛋白的Fc 鏈結(jié)合能有效純化各種來源的抗體包括血清腹水和培養(yǎng)液等并且與哺乳動(dòng)物IgG 具有更高的親和性

DEAE/CM Affi-Gel 藍(lán)膠雙配基功能親和凝膠其中共價(jià)結(jié)合的Cibacron blue F3GA 染料配基可以結(jié)合白蛋白蛋白酶和其他補(bǔ)體蛋白DEAE CM 在不同條件下能有效結(jié)合IgG因此同樣可以一步純化血清和腹水中的IgG并且洗脫液中無蛋白酶活性Protein A 的經(jīng)濟(jì)替代品

Macro-Prep High Q High S 兩步離子交換策略非常便于IgM 的純化純度可達(dá)95%以上

 

Affi-Gel 10 Gel.jpg


抗原純化

Affi-Gel Hz 活化載體通過結(jié)合抗體分子Fc 鏈的碳水化合物部分可以實(shí)現(xiàn)對IgG 分子的定向耦聯(lián)這種結(jié)合產(chǎn)生更特異的抗原-抗體作用比其他介質(zhì)高出100-300%的抗原結(jié)合量

 

Affi-Gel Hz Hydrazide Gel.jpg


重組蛋白純化

Profinity IMAC 介質(zhì)是一種用于分離帶有 His-Tag 標(biāo)簽的重組蛋白的金屬螯合介質(zhì)Profinity IMAC 以最新的UNOsphere 為基質(zhì)IDA 配基螯合金屬Ni具有高流速高載量高分辨率的特點(diǎn)可一步純化His 標(biāo)簽的重組蛋白

Profinity GST 預(yù)裝柱是在UNOsphere 基質(zhì)偶聯(lián)了谷胱甘肽衍生物可以與谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶結(jié)合用于純化帶有GST標(biāo)簽的重組蛋白同樣具有高流速高載量高分辨率的特點(diǎn)

Profinity eXact 融合標(biāo)簽系統(tǒng)是基于親和標(biāo)簽純化蛋白質(zhì)的系統(tǒng)用以解決在其他親和標(biāo)簽系統(tǒng)中普遍存在的標(biāo)簽去除的瓶頸耦聯(lián)在瓊脂糖基質(zhì)中的枯草桿菌蛋白酶可以特異性地識(shí)別枯草桿菌蛋白酶原的N 端前結(jié)構(gòu)域75 個(gè)氨基酸的標(biāo)簽序列利用含氟的洗脫緩沖液引發(fā)了枯草桿菌蛋白酶的酶切活性可以快速而精確的從融合蛋白質(zhì)中切下融合的標(biāo)簽同時(shí)釋放出純化的目標(biāo)蛋白

★不帶標(biāo)簽的普通重組蛋白可采用UNOsphere 離子交換介質(zhì)捕獲陶瓷羥基磷灰石氟代磷灰石CFTMacro-Prep 離子交換或疏水作為中間純化或精純的策略其中UNOsphere Q/S 具有高流速高載量低反壓的特點(diǎn)能有效的進(jìn)行樣品的粗分離陶瓷羥基磷灰石對樣品中的鹽不敏感樣品無需脫鹽即可直接上樣可單獨(dú)用磷酸鹽濃度單梯度洗脫也可以先用氯化鈉濃度梯度洗脫再用磷酸鹽梯度洗脫的雙梯度洗脫模式從而達(dá)到更高的分辨率

 

Profinity IMAC Resins.jpg


包涵體蛋白純化

★包涵體溶于8M 尿素或6M 鹽酸胍中可直接上樣于高化學(xué)穩(wěn)定性的UNOsphereMacro-Prep 離子交換介質(zhì)進(jìn)行純化也可以用陶瓷羥基磷灰石I 型純化對于含His 標(biāo)記的重組包涵體可用Profinity IMAC 金屬螯合快速捕獲并一步純化或者進(jìn)行柱上復(fù)性同步純化

 

酶的純化

UNOsphere 離子交換Macro-Prep 離子交換和疏水羥基磷灰石都能有效分離純化各種酶其中羥基磷灰石和Macro-Prep DEAE/CM 對酶的吸附更加溫和不影響酶的活性

Bio-Rex 70 弱陽離子交換樹脂可提供更高的載量更溫和的吸附作用并支持在位再生和清洗

 

UNOsphere SUPrA.jpg


■硫酸銨沉淀樣品的純化

★沉淀樣品直接上Macro-Prep 甲基或丁基疏水洗脫組分再上陶瓷羥基磷灰石進(jìn)行雙梯度洗脫精純或上離子交換進(jìn)行精純

★先以Bio-Gel P-6DG 脫鹽再上離子交換單梯度洗脫或陶瓷羥基磷灰石雙梯度洗脫

 

■寡糖多糖和多糖肽的純化

Bio-Gel P-2, P-4, P-6 P-10 等可以高分辨率純化寡糖和多糖以聚丙烯酰胺為基質(zhì)不會(huì)與糖形成多氫鍵非特異性吸附可獲得最高得率

Macro-Prep DEAE/CM/High Q High S 離子交換以聚苯乙烯二乙烯為基質(zhì)可用于純化多糖和多糖肽分辨率高無非特異性吸附

 

Bio-Gel P-2-1.png


去除內(nèi)毒素

Macro-Prep 離子交換和陶瓷羥基磷灰石都能有效去除內(nèi)毒素,是一種高效經(jīng)濟(jì)的選擇

Affi-Prep 多粘菌素親和介質(zhì)可結(jié)合來自許多革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素具備很高的去除率線性流速可達(dá)2000cm/hr70bar的耐受壓力可在分析級和工業(yè)級等規(guī)模上應(yīng)用

 

7311550.jpg


耦聯(lián)活化親和純化

Profinity 環(huán)氧化物介質(zhì)可固化含有氨基硫醇羥基等基團(tuán)的親核配基耦聯(lián)后可有效純化蛋白質(zhì)糖類和DNA 例如耦聯(lián)Protein A 以純化單抗耦聯(lián)麥芽糖結(jié)合蛋白和鈣調(diào)蛋白配基可有效純化重組蛋白該介質(zhì)以UNOsphere為基質(zhì)具有*的物理強(qiáng)度??高流速低反壓的大孔結(jié)構(gòu)可以在很高的流速下操作使得生產(chǎn)效率得以提高

Affi-Gel 10 可有效耦聯(lián)pI 6.5-11 的中性或堿性蛋白Affi-Gel 15 用于耦聯(lián)pI<6.5 的酸性蛋白蛋白偶聯(lián)量為35mg/ml 凝膠

Affi-Gel Hz 活化載體通過結(jié)合抗體分子的Fc 段的碳水化合物部分實(shí)現(xiàn)對IgG 分子的的定向耦聯(lián)抗體,,這種結(jié)合產(chǎn)生更特異的抗原和抗體作用比其他介質(zhì)高出100-300%的抗原結(jié)合量

Affi-Gel 102 碳二亞胺活化親和介質(zhì)能耦聯(lián)含初端或末端羧基的配體可以提供經(jīng)濟(jì)靈活的化學(xué)選擇

 

■核酸和病毒純化

CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型對超螺旋DNA 和線性DNA雙鏈DNA 和單鏈DNA 具有ji高的分辨率也能有效分離純化病毒

★基因治療用病毒載體如腺病毒等UNOsphere S Q 兩步純化可獲得最佳的純度和得率而且容易規(guī)模放大

Chelex 100 分子生物學(xué)級樹脂用于緩沖液和離子試劑的超純化可有效去除DNA 樣品中影響測序和PCR 反應(yīng)的各種金屬污染物也可去除各種生物樣品的金屬污染物

AG 50W-X8 陽離子交換樹脂可有效去除DNA 樣品中的溴化乙錠和碘化丙錠的污染

 

CHT Ceramic Hydroxyapatite #1584000.jpg


■去除蛋白質(zhì)樣品中核酸

CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型在中性pH 下對核酸有效吸附而對蛋白質(zhì)吸附較弱用一定的磷酸鹽濃度梯度可有效去除蛋白樣品中絕大部分核酸

UNOsphere S Macro-Prep High S CM 都能有效結(jié)合帶正電的目標(biāo)蛋白而讓核酸流穿過從而去除大部分核酸

UNOspherer Q Macro-Prep High Q DEAE 對核酸具有很高的結(jié)合能力在緩沖液的pH 值低于目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)的情況下使目的蛋白流穿可以高效的去處蛋白質(zhì)樣品中的核酸

 

CHT Ceramic Hydroxyapatite #1588200.jpg


■樣品的脫鹽

★蛋白質(zhì)核酸等生物大分子的脫鹽可采用Bio-Gel P-6DG

AG501-X8 可用于水或其他非離子物質(zhì)的去離子和脫AG11 A8 混合床樹脂可從蛋白樣品中去除SDS 和游離的熒光染料并可從氨基酸中去除無機(jī)鹽

 

■小量和微量蛋白質(zhì)精純

UNO Q/S Monolith采用連續(xù)床技術(shù)高流速超高分辨率10 分鐘內(nèi)分離4 個(gè)蛋白質(zhì)

 

■中草藥與天然產(chǎn)物活性成分的純化

親水性活性成分

UNOsphere Macro-Prep 陰陽離子交換能有效分離其中的生物酸生物堿皂甙等組分

Affi-Gel 硼膠對含鄰式羥基的化合物具有高親和力和高載量可高效分離糖糖肽核苷酸核苷兒茶酚胺等小分子化合物

★具有小分子量排阻范圍的凝膠過濾層析Bio-Gel P-2P-4P-6 P-10 等能以分子排阻模式有效分離各種水溶性小分子物質(zhì)分辨率ji高

AG1AG2 AG50 等分析級樹脂可以分離各種小分子有機(jī)物如各種有機(jī)酸磷酸肌醇氨基酸小肽核苷酸等

 

Macro-Prep High Q Resin.jpg


親脂性活性成分

Bio-Beads S-X 介質(zhì)是中性多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體用于親脂性多聚物和有機(jī)洗脫溶質(zhì)的分子量排阻層析含分子量0-4000-10000-2000 600-14,000等各種不同排阻范圍具有ji高的分辨率兼容幾乎所有的有機(jī)溶劑包括各種芳香族鹵代烷等溶劑可用于分離天然產(chǎn)物中親脂性的物質(zhì)環(huán)境中的各種污染物如殺蟲劑滅鼠劑多環(huán)芳香化合物和不飽和酯類等

 

Bio-Beads S-X3.png


單糖寡糖糖醇和有機(jī)酸的分析

Aminex HPLC 分析柱由聚苯乙烯二乙烯苯樹脂填裝而成的 Aminex HPLC 具有良好的高壓及 pH 穩(wěn)定性高柱效和選擇性通過離子調(diào)節(jié)分配層析技術(shù)分離混合物根據(jù)多種不同的化學(xué)特性分離分子其分離機(jī)制包括離子排阻離子交換正相和反相分配分子量排阻和配體交換等多重機(jī)制分離根據(jù)層析的物理和化學(xué)性質(zhì)可選擇使用一個(gè)或者多個(gè)分離機(jī)制Aminex 是工業(yè)界和分析實(shí)驗(yàn)室zui普遍使用的用于分析碳水化合物有機(jī)酸糖醇有機(jī)堿和其它包括肽和核苷酸的有機(jī)小分子的分析高效液相色譜柱

QQ圖片20220927193640.jpg


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