關(guān)于單克隆篩選的前沿技術(shù)，你了解多少？

來源：Bio-Techne 2022年11月17日 14:22

　　生物藥開發(fā)是一個非常復(fù)雜的過程，而構(gòu)建適用于工業(yè)生產(chǎn)的高表達的穩(wěn)定細胞株是生物藥工藝開發(fā)的起點和基礎(chǔ)，后續(xù)開發(fā)、臨床前和臨床工作都是基于某一確定的細胞株進行開展。

　　與此同時，細胞株產(chǎn)量會影響到生產(chǎn)的成本，質(zhì)量會影響到藥物的安全性和有效性。因此，細胞的單克隆篩選在確保生物制藥產(chǎn)品的純度和均一性上至關(guān)重要。

　　進行單克隆篩選是為了減少細胞庫的異質(zhì)性，減少單克隆細胞篩選的復(fù)雜流程，保持生產(chǎn)過程的一致性和可預(yù)見性，確保產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量在預(yù)設(shè)的范圍內(nèi)。

　　常見的單克隆獲取方法：

　　目前常見的單克隆獲取方法主要包括以下三個：有限稀釋法、高通量細胞系篩選儀和流式細胞熒光分選技術(shù)。

　　一、有限稀釋法：

　　有限稀釋法是傳統(tǒng)的挑選單克隆的方法，該方法操作簡單，對儀器設(shè)備的需求比較低，并且方便與成像系統(tǒng)關(guān)聯(lián)使用。因此，是目前應(yīng)用比較多的單克隆挑選方法。

　　一般要求鋪板密度在0.5cell/well或以下，操作簡單但是耗時較長。另一個缺點是效率比較低，需要在大量的96孔板或者384孔板中進行挑選才有可能獲得理想的克隆（一般需要在不低于1000個克隆中挑選）。

　　二、高通量細胞系篩選儀：

　　高通量的單克隆篩選設(shè)備，是在半固體培養(yǎng)基中使用機器進行篩選。相對于有限稀釋法，單克隆篩選設(shè)備使用半固體培養(yǎng)基，應(yīng)用熒光顯色的方法挑選高表達克隆，因此具有人工干預(yù)少、通量大、效率高的優(yōu)點。

　　但是這種設(shè)備也有不足。有限稀釋法的單克隆培養(yǎng)基與后期工藝培養(yǎng)基更為接近，克隆在孔板的表現(xiàn)更接近在生產(chǎn)過程中的表現(xiàn)。此外，高通量細胞單克隆篩選設(shè)備價格較為昂貴，難以在普通企業(yè)中采用該方法。

　　三、流式細胞熒光分選技術(shù)（FACS）：

　　FACS法的原理是根據(jù)細胞大小、熒光染料和細胞表面marker等因素挑選出所需要的單細胞，當前廣泛應(yīng)用于單細胞分離，稀有細胞分選等多項研究中。一般而言，該法可用于鑒定、分離具有高水平膜蛋白表達的細胞。

　　使用FACS法，單克隆形成率很高，并且FACS法可以和單克隆成像系統(tǒng)連用，確定單克隆。但在沒有成像系統(tǒng)輔助的情況下，一般認為單純的一輪篩選是不夠的，可以通過有限稀釋法挑選亞克隆來增加單克隆率。

　　缺點是在整個篩選過程中，細胞的形態(tài)及狀態(tài)會對條件和分離效果產(chǎn)生影響，流式細胞儀在分選過程中也可能會對細胞狀態(tài)有一定影響。

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