臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞是一種來源于臍帶組織的干細(xì)胞,它是臍靜脈的重要組成細(xì)胞之一,理論上能夠進(jìn)行無限的傳代,所以進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗的時候,常選擇人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),常作為內(nèi)皮細(xì)胞功能和病理學(xué)的研究模型,應(yīng)用于血管生成、愈合、血管建模、組織工程、炎癥、腫瘤等研究中。
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的操作流程:
1.產(chǎn)科無菌取臍帶1根,置于含保鮮液的廣口試劑瓶中4℃保存(避免污染),在最短的時間內(nèi),將臍帶攜入實(shí)驗室,進(jìn)行以下操作。
2.在超凈工作臺或無菌層流工作臺上,將臍帶用D-Hank溶液清洗干凈,將靜脈插管插入臍靜脈中,并用絲線結(jié)扎、固定。
3.用20ml注射器將37℃的D-Hanks溶液注入臍靜脈,反復(fù)沖洗至清洗液無色澄清為止。
4.用血管鉗夾住臍靜脈的另一端,并將0.2%的Ⅰ型或Ⅱ型膠原酶(約20ml)通過靜脈插管注入臍靜脈中,至臍靜脈充盈為止(排掉靜脈管中的空氣)。
5.將臍帶放置在盛有37℃水的玻璃燒杯中,在37°C水浴條件下消化約20min(每5min抽吸/注入1次)。
6.當(dāng)酶液變成混濁時(在顯微鏡下可見大量游離細(xì)胞),將酶液在臍靜脈中反復(fù)抽吸沖打3次后,吸出并置于50ml離心管中。
7.細(xì)胞懸液經(jīng)350g離心5min后,棄去上清液,并用D-Hanks溶液清洗2次,然后再以350g離心5min。
8.棄去上清液,將細(xì)胞溶于8ml內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液(M l99 80ml、FBS 20ml、PS 1ml、L-Gln 2mM、ECGS 10mg/100ml、Heparan 4000U/1 00ml、Insulin mu/100ml)中,接種于預(yù)先包被2%明膠的T25培養(yǎng)瓶中。
9.細(xì)胞培養(yǎng)在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中,24h后換液,棄掉未貼壁細(xì)胞。之后每2~3d換液1次,待細(xì)胞匯合時消化傳代。
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