紫外可見分光分度計(jì)具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn),是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的實(shí)驗(yàn)方法。許多物質(zhì)的測(cè)定都采用分光光度法。在分光光度計(jì)中,將不同波長(zhǎng)的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時(shí),便可得到與不同波長(zhǎng)相對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度。
紫外可見分光分度計(jì)的吸光度范圍應(yīng)該是在0.3-0.7之間,一般在0.2-0.8的范圍里準(zhǔn)確。在分析過程中,很多人都是做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后去測(cè)定樣品,很少有人關(guān)心誤差方面的問題。
在分光分析中,化學(xué)條件引起的誤差比較大,有關(guān)吸光度測(cè)量的誤差,很多人都從書上看的,認(rèn)為吸光度在0.2-0.8之間誤差小,在0.434處最小,但不是特清楚理論根據(jù)。還有一個(gè)問題,如果吸光度在2.0,難道我們就去稀釋樣品,讓其吸光度在0.2-0.8的范圍內(nèi)嗎?反之,如果吸光度在0.02,那我們是不是要濃縮樣品呢?
對(duì)此有兩種不同的看法:
1.如果吸光度不在0.2-0.8之間,我們要去稀釋或濃縮樣品來進(jìn)行測(cè)量;
2.如果吸光度不在0.2-0.8之間,直接進(jìn)行測(cè)量,因?yàn)橄♂尰驖饪s樣品產(chǎn)生的誤差遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于直接測(cè)量吸光度產(chǎn)生的誤差。
在分光光度計(jì)中,透射比的標(biāo)尺是均勻的。吸光度與透射比為負(fù)對(duì)數(shù)關(guān)系,所以吸光度的標(biāo)尺刻度是不均勻的。因此,對(duì)于同一臺(tái)儀器,讀數(shù)的波動(dòng)對(duì)透射比來說,應(yīng)基本為一定值;而對(duì)吸光度來說,它的讀數(shù)則不在為定值。由分光光度計(jì)讀數(shù)標(biāo)尺上吸光度與透射比的關(guān)系可以看出,吸光度越大,讀數(shù)波動(dòng)所引起的吸光度誤差也越大。
相關(guān)產(chǎn)品
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