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今天小編給大家講講影響等溫滴定量熱儀基線位置的因素有哪些?
等溫滴定量熱法是近年來發展起來的研究生物熱力學和生物動力學的重要方法。它通過高靈敏度自動微量熱計連續、準確地監測和記錄變化過程的量熱曲線，同時提供原位、在線和無損的熱力學和動力學信息
1、在使用過程中會出現基線位置變化的問題。這里列出了影響基線位置的一些主要因素1.1安裝ITC儀表時，避免安裝在陽光直射的位置，以免造成長期陽光直射，這將導致溫度沿著滴定儀傳輸到樣品池，并導致基線漂移
2、不要長時間將空調直接吹到ITC的安裝位置，當空調安裝在基線
3、處時，避免因不小心的手動操作而導致樣品漂移，例如滴定針意外彎曲(滴定針放置在靜止位置時經常發生，但許多情況不容易發現)，在滴定過程中，彎曲的滴定針可能會繼續摩擦樣品池的側壁，導致樣品池的溫升
4、安裝不到位或固定螺栓松動。更換滴定針后，滴定針可能安裝不到位(移液管底部的玻璃針管太長)，或長期使用后固定滴定針的螺栓可能松動，導致滴定針下沉，在滴定過程中，由于樣品池底部的滴定針長時間摩擦，可能導致樣品池的溫度升高
5、混合速率的影響。不同的攪拌速度將導致不同的熱釋放(攪拌速度越高，溫度越高，基線越低，反之亦然)。通常，在ITC實驗中，我們設置了一個恒定的攪拌速度，這通常不會因為攪拌速度的變化而改變基線。然而，當由于某些移液管故障或高樣本粘度導致攪拌器旋轉不均勻時，樣本池的熱量可能會發生變化
6、樣本池中存在氣泡。這種現象可能是影響初始基線位置的最常見原因。樣本溫度和樣本添加技能可能會影響基線。當樣品池中因溫度差(因為水的比熱容大于空氣的比熱容，且氣泡占據水分子的位置，導致樣品池中的總比熱容降低)而增加樣品或脫氣而產生小氣泡時，當向樣品池施加與參考池相同的功率時，樣品池的溫度將略高于參考池的溫度，這使得傳感器“錯誤地認為”樣品池更熱，這會降低樣品池的功率，導致基線下降。憑借出色的操作技能，實際初始基線和設定參考功率之間的差異通常約為0.1Cal/s。當然，通常情況下，±1 ucal/s初始基線位置的偏差是可以接受的。需要注意的一個問題是，在處理含有洗滌劑的膜蛋白樣品(如Triton X100、np40等)時，建議一次小心添加樣品，不建議通過抽吸排出氣泡，這可能會使問題更加嚴重
7、參考細胞中存在氣泡。這種現象與上述現象正好相反
8、基線顯示逐步下降。當滴定針中只有空氣或樣品未*填充時，在滴定過程中，隨著樣品的注入，樣品池的比熱容量由于在樣品池中連續注入空氣而降低，導致基線逐步下降;另一個可能的原因是連接滴定針的填充端口適配器(FPA)磨損，需要更換新的FPA;在用ITC研究酶動力學的過程中也會出現類似的現象。可考慮反應物之間是否存在可能的催化過程
9、樣品池未滿。當樣品池未*填充時，隨著反應物逐漸注入滴定器，樣品池逐漸填充，導致樣品池的比熱容逐漸增加，基線逐步升高。因此，請加滿280 UL樣品并排出氣泡。
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