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第三代促甲狀腺激素受體抗體檢測產品的性能評估

來源:天津阿斯爾生物科技有限公司   2022年10月17日 17:28  

 

 

Graves病患者血清中,TSH受體自身抗體(TRAb)的病理作用已經明確。目前,檢測TSHR自身抗體有兩種方法。一種方法是基于類似TSH的自身抗體在細胞系中誘導第二信使cAMP的能力,稱為生物測定(bioassay)方法,該方法能夠根據其增強或抑制cAMP合成的生物活性來區分刺激性抗體(TSAb)和阻斷性抗體(TSBAb)。另一種方法是基于豬TSHR或人類重組TSHR的TRAb檢測,患者血清中的TRAb和牛TSH(用I-125或生物素標記)共同競爭TSHR上的結合位點。

 

Smith博士(RSR公司創始人)初次報道了一種測定血清TRAb的新方法[1],其中,患者血清中的TRAb可與生物素標記的促甲狀腺激素受體人單克隆刺激型抗體M22[1]產生競爭,抑制M22與ELISA板孔上包被的TSHR的結合,以競爭抑制法構建酶聯免疫吸附試驗(ELISA)[2]。

 

本研究旨在比較兩代和三代TRAb檢測方法的性能差異,二代為抗體競爭抑制TSH,三代為抗體競爭抑制M22。此外,我們評估了三代TRAb檢測產品在鑒別未經治療的Graves病(GD)患者和無痛性甲狀腺炎(PT)患者上的應用前景。

 

 

 

 

研究對象

 

 

 

 

 

 

檢測方法

 

圖1展示了基于M22的測定(表述為第三代TRAb,以TRAb3rd表示)和基于抑制TSH-生物素的測定(表述為第二代TRAb測定,以TRAb2nd表示)的檢測原理。

 

圖1 二代和三代TRAb檢測原理。二代TRAb利用待測TRAb與TSH-生物素形成競爭抑制,抑制其與固相TSHR結合;三代TRAb利用待測TRAb與M22-生物素形成競爭抑制,抑制其與固相TSHR結合。

 

臨界值定義以及統計分析

 

研究分析了230名健康對照者的血清抗體,只有1名(0.43%)對M22結合值的抑制率大于臨界值15%(32.8%)。

 

從244例未經治療的GD患者中計算靈敏度(真陽性結果),并從三個對照組中計算特異性(真陰性結果)。二代TRAb檢測特異性*,靈敏度99.2%時,抑制率臨界值為22%。


為了確認三代TRAb產品的臨床臨界值,我們對244例未經治療的GD患者(疾病組)和三個不同對照組(下表)進行了檢測,并對檢測結果進行了ROC曲線分析。

 

 

第三代TRAb檢測在三組對照中的抑制率臨界值分別為14.5%(a)、22.0%(b)和22.0%(c),靈敏度均為99.6%,特異性分別為99.6%(a)、96.6%(b)和97.5%(c)(圖2)。

 

圖2 三代TRAb不同對照組間ROC曲線。a:疾病組+對照組1;b:疾病組+對照組2;c:疾病組+對照組3。

 

根據結果建議三代TRAb抑制率臨界值為15%。

 

二代和三代TRAb檢測對比

 

在15%的臨界值下,第三代TRAb對于新診斷GD、PT和SAT患者的血清樣本靈敏度和準確性與第二代相比如表1所示,數值分布如圖3所示。

 

圖3 二代與三代TRAb在不同患者組間檢測數值分布圖

注:a組為三代TRAb分別在GD、PT以及SAT三組間檢測值分布;b組為二代TRAb在三組間分布。

 

在244例未經治療的Graves病患者中,三代檢測與二代檢測結果高度相關(r=0.911),但三代檢測(243例,99.6%)的抗體陽性率高于二代檢測(242例,99.2%)。在對照組中,三代檢測在9.2%的PT組和6.7%的亞急性甲狀腺炎(SAT)組中檢出抗體;二代檢測在16.8%的PT組和13.3%的SAT組中檢出抗體。

 

表1 二代與三代TRAb在三個疾病組間陽性率的比較

 

綜合來看,三代TRAb在GD組檢出率更高,PT組和SAT組檢出率更低,整體性能更優。與二代檢測相比,三代檢測對GD和PT的診斷準確性顯著提高(p=0.0026)。

 

圖4 二代與三代TRAb間結果相關性比較。橫軸為三代TRAb,縱軸為二代TRAb。

 

 

 

 

討論

 

甲狀腺功能亢進的流行病學數據差異較大。在日本等碘攝入量高的國家及地區,大多數甲狀腺毒癥病例是由GD和PT引起的,而在碘攝入量低的地區,GD和毒性多結節性甲狀腺腫是甲狀腺功能亢進的常見原因[4]。在目前的臨床實踐中,需要在甲狀腺毒癥患者中檢測TRAb以鑒別GD患者。在本研究中,我們證實了基于M22-生物素競爭抑制的ELISA方法(三代TRAb)在診斷GD以及鑒別GD和PT引起的甲狀腺毒癥患者方面的高靈敏度。

 

Smith博士等人[1]對基于TSH的ELISA和基于M22的ELISA進行了比較,證實基于M22結合抑制的作用更明顯,從而提高了檢測的靈敏度和精確度。在本研究中,我們證明了在未經治療的244例Graves病患者中,M22與TSHR的結合抑制效果,與TSH與TSHR的結合抑制效果高度相關(r=0.911)。此外,在244例未經治療的GD患者的血清中,三代TRAb對GD的診斷靈敏度為99.6%,高于二代TRAb的99.2%。在我們的PT患者組中,第三代TRAb檢測顯示陽性率為9.2%,而二代TRAb為16.8%。雖然其原因尚不清楚,但可能的機制似乎涉及其在TSHR上不同的結合位點。有趣的是,在三代檢測結果中,119例PT患者中有8例觀察到抑制率結果高于50%,對此還需要進一步開展人甲狀腺刺激阻斷性抗體(TSBAb)檢測等研究。

 

我們的結果最終表明,在患有GD和PT的甲亢患者中,基于M22第三代TRAb檢測的準確性為96.7%,顯著優于第二代TRAb準確性為93.9%(p=0.0026)。尤其是在GD和PT患者的鑒別診斷上,三代檢測性能顯著優于二代。新方法的在預測停藥后GD的預后情況,以及自身抗體與Graves眼病的關系上的臨床價值有待進一步發掘。

 

 

使

 

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參考文獻:Kamijo K ,   Ishikawa K ,   Tanaka M . Clinical Evaluation of 3rd Generation Assay for Thyrotropin Receptor Antibodies : The M22-biotin-based ELISA Initiated by Smith[J]. Endcor J, 2005, 52.

 

 

 

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