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探討抗體的分裝與保存

來源:上海撫生實業有限公司   2022年10月08日 11:06  

抗體(antibody)是指機體由于抗原的刺激而產生的具有保護作用的蛋白質。它(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌,被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質,僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個*特征,該外來目標被稱為抗原。

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抗體的分裝與保存:

抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當,大部分抗體活性都可以維持數月甚至數年。

1. 收到抗體后請在12000rpm 離心1-5min, 將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下來后再打開管蓋進行分裝和保存!

2.對絕大多數抗體來說,保存在-20 ℃是*足夠的。沒有任何證據顯示保存在-80℃ 會有更多的好處!

3. 分裝的量以一次實驗用完為好,最少不要少于10ul 每份。因為分裝體積越小,抗體的濃度越可能會受到蒸發以及管壁吸附的影響。分裝可以最da 程度的降低反復凍融對抗體活性的損害,同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。復融后的分裝抗體如果一次用不完,將剩余母液保存在4 度,避免再凍起來!

4. 大部分抗體收到后4 度短暫保存1-2 周對抗體活性是沒有影響的,因蛋白在高濃度時更不容易降解。所以如果抗體很快(1-2 周)會使用,推薦在4 ℃保存,這是為了避免反復凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20 ℃ 或-80 ℃。而對于抗體工作液來說最好當天配制當天用完。

5.為了避免反復凍融,很多抗體公司會加50%的甘油到抗體中來避免反復凍融,甘油在-20 度 會降低冰點,這對很多抗體可能是可行的。但加入甘油的溶液不建議在-80 度保存,因為這已經超過了甘油的冰點。

6.因蛋白在高濃度時更不容易降解,因此部分抗體公司通過在抗體中加入BSA 等蛋白質穩定劑來提高蛋白質濃度以達到保護抗體的目的。但是如果抗體要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為這些穩定劑會和抗體一起競爭結合標記物。

7.為了防止微生物污染,抗體溶液中一般會加入終濃度0.02% (w/v)的疊氮化na。但在一些特殊情況下,如抗體用于處理活細胞和體內研究,以及要偶聯帶有氨基基團的抗體時,需要除去疊氮化na。通常的去除方法有凝膠電泳和超濾法


特殊抗體的保存條件:

1. 酶聯抗體:保存在4 ℃,避免凍起來。否則會導致酶活性的下降或者喪失。

2. 偶聯抗體:所有偶聯抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體,對光極為敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的。偶聯后的抗體可以加入疊氮化na保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯的抗體,thimerosal(merthiolate)可以替代疊氮化na作為保護劑。

3. IgG3 的同型對照:永遠保存在4 度,避免凍起來。因為如果出現凍融過程,該抗體非常容易形成多聚體。



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