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Foxp3/轉(zhuǎn)錄因子染色固定破膜試劑盒的操作方法
Foxp3/轉(zhuǎn)錄因子染色固定破膜試劑盒是一款經(jīng)過(guò)優(yōu)化的專(zhuān)門(mén)針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子、核蛋白（例如Foxp3和STAT3）以及細(xì)胞因子和趨化因子等流式抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)抗原染色時(shí)所用的固定、破膜試劑。
操作方法：
1.取100μL細(xì)胞/管（約1×106個(gè)細(xì)胞）于流式管內(nèi)。
2.[可選步驟] 根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行Fixable Viability Dye（死活細(xì)胞鑒定染料）染色。
3.按照抗體說(shuō)明書(shū)加熒光標(biāo)記抗體染細(xì)胞表面Marker。
4.孵育完成后加入1mL細(xì)胞染色緩沖液，300g離心5min，棄上清，再加入100uL細(xì)胞染色緩沖液重懸細(xì)胞。
5.加入1mL 1× Fixation Working Solution，渦旋混勻，4℃反應(yīng)30min，反應(yīng)完后，600g離心5min，棄上清。
6.加入2mL 1× Permeabilization Working Solution，渦旋混勻，600g離心5min，棄上清。
7.重復(fù)步驟6。
8.加入100μL 1×Permeabilization Working Solution重懸細(xì)胞。
9.[可選步驟] 加2µL 2％正常小鼠/大鼠血清于細(xì)胞懸液中封閉Fc受體，室溫下孵育15min。
10.按照抗體使用說(shuō)明書(shū)加熒光標(biāo)記的核染色抗體，混勻后室溫避光孵育30min。
11.加入2mL 1×Permeabilization Working Solution，600g離心5min，棄上清。
12.加入適量細(xì)胞染色緩沖液重懸細(xì)胞，即可上機(jī)檢測(cè)。
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