包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時(shí)間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定。通常在ELISA試劑盒板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置過夜,37℃中保溫2小時(shí)被以為具有平等的包被效果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí),因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面,業(yè)已起到了類似封SUO劑的作用。并非所有的ELISA固相均需封SUO,封SUO不當(dāng)反而會使陰性本底增高。ELISA試劑盒脫脂奶粉也是一種良好的封SUO劑,其最大的特點(diǎn)是價(jià)廉,可以高濃度使用(5%)。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。
高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封SUO劑使用,但因?yàn)槟谭鄣某煞輳?fù)雜,而且封SUO后的載體不易長期保留,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。ELISA試劑盒封SUO的手續(xù)與包被相類似。一般說來,雙抗體夾心法,只要酶標(biāo)記物是高活性的,操縱時(shí)洗滌*,不經(jīng)封SUO也可得到滿足的結(jié)果。封SUO是否必要,取決于ELISA試劑盒的模式及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)前提。
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