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Kromasil 色譜柱的使用與維護(hù)

來源:廣州信譜徠科學(xué)儀器有限公司   2022年08月27日 12:34  

Kromasil 色譜柱的使用與維護(hù)

 

 

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色譜柱安裝與平衡

使用經(jīng)過濾并脫氣的流動(dòng)相( 不含任何緩沖液) *沖洗HPLC 泵和管線,確保系統(tǒng)中沒有氣泡。按照流向標(biāo)簽( 位于色譜柱上) 指示的方向?qū)⑸V柱一端連接至進(jìn)樣器,另一端不接檢測(cè)器。將泵流速設(shè)置為0.1 mL/min( 或系統(tǒng)允許zui低設(shè)置) 并在5 分鐘內(nèi)增大至正常流速。

當(dāng)色譜柱出口處有溶劑自由流出時(shí)停止泵送,擦拭出口端并將其連接到檢測(cè)器。

以正常流速和約10-30 倍色譜柱體積的流動(dòng)相來平衡色譜柱。

 

檢測(cè)柱效

強(qiáng)烈建議用戶在收到Kromasil 原裝jin口色譜柱15 天內(nèi)進(jìn)行柱效檢測(cè),并在整個(gè)使用周期內(nèi),

進(jìn)行定期的柱效測(cè)試,以便隨時(shí)監(jiān)測(cè)色譜柱的壽命情況。

 

運(yùn)行參數(shù)

5 μm 3.5 μm 色譜柱最大耐受壓力400 Bar2.5 μm 1.8 μm 色譜柱最大耐受壓力1000 bar。最高工作溫度不高于60 ℃。在使用Kromasil Classic 系列C18C8C4Phenyl

色譜柱時(shí),流動(dòng)相pH 控制在1.5-9.5 之間,這樣有利于延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。

 

流動(dòng)相的配置

僅使用HPLC 色譜純?nèi)軇⑺⒆罡呒兌鹊幕瘜W(xué)品和試劑。

使用前對(duì)所有流動(dòng)相進(jìn)行過濾和脫氣。

確保溶劑可互溶。

 

色譜柱的保存

色譜柱使用完畢后,應(yīng)盡可能地沖洗掉殘留在色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)和沉積物。保存在適合的儲(chǔ)存溶劑中,儲(chǔ)存溶劑可以參考COA 中建議使用溶劑。儲(chǔ)存環(huán)境需保持溫度穩(wěn)定、避光,并注意檢查Peek堵頭,防止松動(dòng)導(dǎo)致柱內(nèi)溶劑流失。

 

色譜柱的清洗

柱壓升高,保留時(shí)間變化和柱效降低都是色譜柱被污染的表現(xiàn)。

多數(shù)情況下,通過正確的沖洗能夠解決上述問題。我們需要謹(jǐn)記的是越早沖洗或再生越會(huì)更容易的解決上述問題。

 

通常具有較強(qiáng)吸附的雜質(zhì)都集中在色譜柱進(jìn)口一端,zui簡(jiǎn)單的方法是對(duì)色譜柱進(jìn)行反沖。反沖的方法只對(duì)填裝緊密的色譜柱有效,柱性能也不會(huì)發(fā)生變化。

 

反沖時(shí),請(qǐng)按照下述的一般步驟,使用特定溶劑對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗,并根據(jù)不同廠商的建議進(jìn)行,以免損壞色譜柱。

 

反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1,

Phenyl,   PhenylHexyl)

未鍵合的硅膠柱(SIL)

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. : 乙腈=95:5

b. 四氫呋喃

c. 乙腈: =95:5

d. 不含鹽的流動(dòng)相

e. 流動(dòng)相

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 異丙醇

b. 甲醇

c. 乙酸乙酯

d. 流動(dòng)相

鍵合正相柱(CN, Diol)

用于蛋白/ 多肽分析的反相柱(C18,

C18(w),   C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl)

使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗

a. 三氯jia烷

b. 異丙醇

c. 二氯甲烷

d. 流動(dòng)相

a. 使用20 倍柱體積的不含鹽流動(dòng)相進(jìn)行清洗

b. 梯度清洗

流動(dòng)相A: 0.1%TFA 水溶液 : 乙腈=95 : 5流動(dòng)相B: 0.1%TFA 乙腈: 異丙醇=1 : 2

30 min 內(nèi),B 相從25% 升至100% 進(jìn)行清洗,運(yùn)行2 個(gè)梯度程序。

c. 流動(dòng)相平衡,切勿將色譜柱保存在TFA

 

反沖時(shí),請(qǐng)將流動(dòng)相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測(cè)器。反沖時(shí),請(qǐng)將流動(dòng)相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測(cè)器。

image.png

Kromasil 保護(hù)柱

色譜柱一旦污染,沖洗過程將非常耗時(shí),建議使用保護(hù)柱減少對(duì)色譜柱的污染,

Kromasil 保護(hù)柱 :

Kromasil 色譜柱具有相同的填料,*佳保護(hù)色譜柱,同時(shí)不影響分析結(jié)果。

柱芯柱套式設(shè)計(jì),成本低。

 

部分常規(guī)保護(hù)柱訂貨信息

貨號(hào)

描述

00000HHO

2.1-4.6 mm guard holder

00000KCO

2.1-21.2 mm guard coupler

M05CLNGC

Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CLNSK

Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05CMNGC

Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CMNSK

Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05CSNGC

Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CSNSK

Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05NHNGC

Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05NHNSK

Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05PHNGC

Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

M05PHNSK

Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit

S05CNNGC

Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

S05CNNSK

Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05SINGC

Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05SINSK

Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit

S05DINGC

Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

S05DINSK

Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit

 

 

 

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