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羊口蹄疫抗體(FMDV Ab) 試劑盒使用說明書

來源:上海滬鼎生物科技有限公司   2022年08月17日 17:51  

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的:

本試劑盒用于定性測定血清,血漿及相關液體樣本中口蹄疫抗體(FMDV Ab)

實驗原理

本試劑盒間接法測定標本羊口蹄疫抗體(FMDV Ab)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原與樣品中口蹄疫抗體(FMDV Ab)溫育后,加入生物素標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中羊口蹄疫抗體(FMDV Ab)的存在與否。 

試劑盒組成 

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

8

樣品稀釋液

6ml×1

2

鏈霉親和素-HRP

6ml×1

9

陰性對照

0.5ml×1

3

酶標包被板

12×8

10

陽性對照

0.5ml×1

4

生物素標記的抗-IgG抗體

6ml×1

11

密封袋

1

5

顯色劑A

6ml×1

12

封板膜

3

6

顯色劑B

6ml×1/

13

說明書

1

7

終止液

6ml×1




 

標本要求 

1不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

操作步驟

1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1

2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻37℃溫育45分鐘。

3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。

5. 加生物素標記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl37℃溫育30分鐘

6. 洗滌:操作同4

7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

8. 洗滌:操作同4

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)

11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

 

結果判定:

  試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.20

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為口蹄疫抗體(FMDV Ab)陰性

  陽性判定:樣品OD 臨界值(CUT OFF)者為口蹄疫抗體(FMDV Ab)陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

3濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

規格:

96人份/

保存條件及有效期

1試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

 

 


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