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細胞培養的污染有哪些類型

來源:維根技術(北京)有限公司   2022年08月10日 16:50  
細胞培養污染往往是細胞培養實驗室常遇到的問題,有時會帶來十分嚴重的后果。細胞培養的污染物可分為兩大類,化學污染物,如培養基、血清和水的雜質、內毒素、增塑劑和洗滌劑;以及生物污染物,如細菌、霉菌、酵母、病毒、支原體,以及其他細胞系的交叉污染。雖然不可能*消除污染,但通過*了解其來源并遵循良好的無菌技術,就可以減少其發生的頻率和嚴重性。

 

 



生物污染的主要類型:



1

細菌污染

細菌是普遍存在的單細胞微生物。它們的直徑通常為幾微米,并且可以具有各種形狀,從球體到棒狀和螺旋狀。由于它們無處不在和生長速度快,細菌以及酵母菌和霉菌是細胞培養中常見的生物污染物。

 

 

檢測:在被感染后的幾天內,通過肉眼檢查培養物很容易檢測到細菌污染;受感染的培養物通常出現渾濁(即渾濁),有時表面有一層薄膜。培養基的 pH 值突然下降也經常遇到。在低倍顯微鏡下,細菌表現為細胞間微小的移動顆粒,在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個細菌的形狀。

 

 

2

霉菌污染

霉菌是真核微生物,以稱為菌絲的多細胞細絲形式生長。這些多細胞細絲的連接網絡包含基因相同的細胞核,被稱為菌落或菌絲體。

 

 

檢測:與酵母菌污染類似,培養物的 pH 值在污染的初始階段保持穩定,然后隨著培養物受到更嚴重的感染并變得渾濁而迅速增加。在顯微鏡下,菌絲體通常表現為細絲狀,有時表現為更密集的孢子團。許多霉菌物種的孢子在其休眠階段可以在極其惡劣和不適宜居住的環境中生存,只有在遇到合適的生長條件時才會被激活。

 

 

3

病毒污染

病毒是借助宿主細胞進行繁殖的微觀感染因子。它們極小的個體大小使得它們很難在培養中檢測到,也很難從細胞培養實驗室使用的試劑中去除。因為大多數病毒對其宿主有非常定向的依賴,它們通常不會對宿主以外物種的細胞培養產生不利影響。然而,使用病毒感染的細胞培養物可能對實驗室人員造成嚴重的健康危害,尤其是在實驗室培養人類或靈長類動物細胞時。

 

 

檢測:細胞培養物的病毒感染可以通過電子顯微鏡、使用一組抗體的免疫染色、ELISA 測定或使用適當病毒引物的 PCR擴增來檢測。

 

 

4

支原體污染

支原體是沒有細胞壁的簡單細菌,被認為是最小的自我復制生物。由于它們的尺寸極小(通常小于一微米),支原體很難被檢測到,直到它們達到高的密度并導致細胞培養物變質;在此之前,通常沒有明顯的感染跡象。

 

 

一些生長緩慢的支原體可能會在培養物中持續存在而不會導致細胞死亡,但它們可以改變培養物中宿主細胞的行為和新陳代謝。

 

檢測:慢性支原體感染可能表現為細胞增殖率降低、飽和密度降低和懸浮培養中的凝集;然而,可靠的檢測支原體污染的方法是定期使用熒光染色(例如,Hoechst 33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或微生物測定對培養物進行檢測。

 

 

5

酵母菌污染

酵母菌是單細胞真核微生物,大小從幾微米(通常)到 40 微米(很少)不等。

 

 

檢測:與細菌污染一樣,被酵母菌污染的培養物會變得渾濁,尤其是當污染處于晚期時。被酵母菌污染的培養物的 pH 值幾乎沒有變化,直到污染變得嚴重,在此階段 pH 值通常會增加。在顯微鏡下,酵母表現為單個卵形或球形顆粒。

 

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