實驗原理
首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度,然后通過高質量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,最后上樣至液相色譜-串聯質譜中進行分析,通過相應的數據庫檢索匹配,一次可鑒定成百上千個修飾位點。
蛋白分析的應用
1. 磷酸化:信號轉導、細胞周期、生長發育及癌癥機理等;
2.糖基化:蛋白質折疊、更新以及免疫應答等;
3.乙酰化:基因表達調控、細胞凋亡、細胞代謝、蛋白質穩定性以及神經退行性病變等;
4.泛素化:細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA修復以及信號轉導等;
5.甲基化:染色質結構及轉錄調控等;
6.丙酰化 / 丙二酰化 / 戊二酰化 / 琥珀酰化:主要存在于線粒體和細菌中,與代謝過程密切相關。
實驗流程
1.蛋白提取;
2.蛋白酶消化;
3.修飾肽段富集
4.LC-MS/MS分析;
4.生信分析。
實驗完成周期及交付標準
1. 周期:6周左右
2. 交付標準:質譜原始數據、蛋白鑒定列表、修飾位點鑒定表、實驗報告(主要儀器、試劑和實驗方法)
需確認的信息
1. 確認樣品所屬種屬、分析需求。
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