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ibidi實驗方案|在流體環境下細胞培養進行粘附實驗

來源:拓赫機電科技(上海)有限公司   2022年07月22日 10:27  

  在流體環境下細胞培養進行粘附實驗,該應用描述了一種在流動下的粘附試驗,該試驗旨在研究特定細胞表面分子的作用,以確定它們在細胞附著和粘附到其他細胞類型期間的潛在相互作用。


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  實驗流程  

  1.準備EOMA細胞稀釋液:根據制造商的說明,使用非酶細胞解離溶液分離先前培養的EOMA細胞。使用血細胞計數器(Neubauerchamber)對細胞進行計數。在EC培養基中將細胞稀釋至1.2x106個細胞/ml的濃度?! ?/p>


  2.種入EOMA細胞:在3個 µ-SlidesI0.6mmLuer(ibidi,80186)中加入150µlEOMA細胞稀釋液(每個µ-Slide1.75x105EOMA細胞),然后孵育3小時。


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  表1:實驗設置

  

  3.啟動流量:播種三小時后,將2個µ-Slides連接到流體單元FU,使用總量2.7毫升EC培養基。在8.2mbar的壓力下將EOMA細胞表面的剪切應力設置為0.5dyn/cm2。測量流速并使用兩個FU的平均值來計算校準因子。提前孵育FU和連接的載玻片過夜。第三個帶有EOMA細胞的µ-Slide用作靜態控制。在沒有任何流動的情況下孵育它過夜。

  

  4.準備MM細胞:根據制造商的方案,用CellTrackerGreen(CMFDA)染料在600µlRPMI培養基(不含FCS)中染色6x105MM細胞。標記后,離心細胞并使用血細胞計數器對其進行計數。

  

  5.開始與MM細胞共培養:停止流動并在無菌條件下從FU水庫中取出EC培養基。要開始共培養,將RPMI培養基(含10%FCS)和EC培養基以1:1的比例混合,并填充該混合物總體積為2.5ml,其中含有1.5x105MM注入兩個FU儲液罐。將FU重新連接到泵系統并繼續流動24小時。

  

  6.分子阻斷:將MM細胞添加到ECs后24小時,用100µg/ml抗體(載玻片 #2)或相應的同種型對照(載玻片 #1)處理細胞,將它們直接添加到FU,無需更換介質。將孵育保持在流動狀態下24小時。

  

  7.清洗和成像:從FU上斷開µ-Slides。用PBS清洗細胞一次,以去除任何非貼壁細胞。使用共聚焦顯微鏡獲取熒光圖像,以可視化附著在EC層上的標記MM細胞。

  

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  圖1:與同種型對照處理(左圖)相比,阻斷特定表面分子(右圖)時,MM細胞對ECs的粘附性降低

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