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EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氫大麻酚代謝物并以GC-MS定量
在(-)-11-nor-9-羧基-△9-四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)的氣相色譜-質譜分析中，評估了EmporeTM固相萃取柱（4215SD-C18）的樣品制備。固相萃取柱性能由測定的回收率決定。回收率范圍在78.7-110.1%。標準曲線線性范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時，相關系數R2=0.9998。
關鍵詞：
四氫大麻酚，THCCOOH，外標法，GC-MS
前言：
美國CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技術，以其有機溶劑消耗少、結果重現性高、樣品制備的通量高、提取物更清潔，可減少 GC 系統的污染以及自動化提取等優勢[1]，廣泛應用于藥物檢測領域[2,3]。本實驗使用美國CDS公司膜式固相萃取柱（EmporeTM，4215SD-C18）提取尿液中△9-四氫大麻酚（THC，大麻）代謝物（-）11-nor-9-羧基-△9-四氫大麻酚 (THCCOOH)，并以GC-MS分析定量。
1， 實驗過程
1.1 儀器與試劑
所有試劑均為分析純或更高。
THCCOOH（100.0±0.6 μg/mL）和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化試劑，均購自西格瑪奧德里奇（上海）貿易有限公司；
人工尿液（PH：5.7-500mL），購自福州飛凈生物科技有限公司；
乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；
甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；
正己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；
EmporeTM 膜式固相萃取柱：4215SD-C18，購自美國CDS公司；
氣質聯用儀：7890B-5977B安捷倫氣質聯用儀，Agilent公司。
1.2 工作液配制
THCCOOH標準使用溶液：0.1 μg/mL，溶劑體系為甲醇；
1.3 實驗部分
1.3.1 樣品制備
取12個15mL離心管，分別裝入3mL尿液樣品，再加入不同體積的THCCOOH標準使用液（加標量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng），每個標點進行平行兩次制備。然后加入300μL氫氧化鉀溶液（10mol/L）,在60℃水浴環境下水解15min取出后冷卻至室溫，再以冰醋酸調節pH值到4.0~4.5。
EmporeTM固相萃取柱（C18, 7mm/3mL）預先用150μL甲醇進行活化，之后進行上樣（在重力作用下使樣品自然流下），上樣結束后用750μL甲醇-水溶液（50：50）淋洗萃取柱，在690mmHg真空狀態下干燥5min，最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液（75：25）進行洗脫。
1.3.2 凈化與濃縮
洗脫液經40℃氮吹至干，然后加入100μL衍生試劑（MSTFA+1%TMCS），在60℃水浴條件下衍生20min，轉移至樣品瓶待 GC-MS分析。
1.3.3 標準曲線配制
取6個20mL樣品瓶，分別加入不同體積THCCOOH標準使用溶液，加入THCCOOH的質量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng，參照與加標樣品制備同等濃縮、衍生條件進行前處理，待GC-MS分析。
1.3.4 GC-MS分析
進樣口溫度：290℃；進樣模式：不分流進樣；流速：1.0mL/min；
柱溫：100℃保持1min，然后以30℃/min的速度升至300℃，保持5min。
表1 THCCOOH定量、定性離子
| 化合物 | 定量、定性離子 | 保留時間（min） |
| THCCOOH | 371/473/488 | 12.158 |
2, 實驗結果（外標法）
實驗發現：標準曲線第一個點（3ng）信噪比較低，難以準確積分。標準曲線第五個點（150ng）結果明顯偏低，為實驗操作衍生化失誤引進誤差。
圖1標準曲線校準點重疊色譜圖
圖2 標準曲線
3，結果與討論
本次實驗展示了一種使用CDS-EmporeTM 固相萃取柱（215SD-C18），對尿液中四氫大麻酚代謝物（THCCOOH）進行富集提取的簡單有效方法。實驗中，尿液加標樣品經水解、固相萃取凈化、濃縮以及衍生等前處理步驟后，經GC-MS分析得到不同濃度下四氫大麻酚代謝物（THCCOOH）的加標回收率，回收率范圍在78.7-110.1%，結果較好。標準曲線濃度范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時，相關系數R2=0.9998，具有較好線性。實驗表明，CDS-EmporeTM 固相萃取柱（215SD-C18）適用于尿液中四氫大麻酚代謝物（THCCOOH）的萃取凈化。該方法具有操作簡便，線性范圍寬，穩定性高等優點，并在尿液量少，分析物濃度較低時顯示出優異的回收率。
4，參考文獻
1，Jasbir Singh and Linda Johnson，Solid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MS，Journal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997。
2，R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.
3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-△9-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)
圖3 不同濃度加標樣品重疊色譜圖
表2 加標回收率結果
| 序號 | 加標量 | 回收率 % | 均值 % | |
| ng | 1 | 2 | ||
| 1 | 15 | 82.2 | 96.4 | 89.3 |
| 2 | 30 | 101.8 | 109.4 | 105.6 |
| 3 | 60 | 89.2 | 78.7 | 83.9 |
| 4 | 150 | 93.1 | 101.3 | 97.2 |
| 5 | 300 | 91.4 | 110.1 | 100.7 |
注：因3ng標點信噪比偏低，在此不做數據統計
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