在細(xì)胞培養(yǎng)中你知道如何消除組織培養(yǎng)的污染嗎
在細(xì)胞培養(yǎng)中你知道如何消除組織培養(yǎng)的污染嗎
當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),檢查HEPA過(guò)濾器。 高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。下面是我司推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
2. 分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。
3. 每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
4. 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2~3代。
5. 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
6. 重復(fù)步驟4。
7. 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代,確定污染是否以已被消除。
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