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內酰胺酶大腸桿菌(大腸埃希氏菌)LAMP試劑盒使用方法

來源:上海莼試生物技術有限公司   2022年05月18日 14:39  

RT-超廣譜RT-內酰胺酶大腸桿菌(大腸埃希氏菌)LAMP試劑盒使用方法:


一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。


1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。


2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。


3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。


4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。


5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。


6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。


二、樣品 DNA 的制備


7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。


8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。


三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)


9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

柱式水樣DNAout

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柱式細菌DNAout(50次)

病毒DNA提取

96孔板病毒DNAout(離心法)(1次)

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96孔板病毒DNAout(真空法)(見關聯產品)

M13噬菌體單鏈基因組DNAout(見關聯產品)

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一管式病毒DNA-RNAout

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