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微生物無菌檢測操作規程如下：
1、無菌室應配備無菌操作間和緩沖間。無菌操作間潔凈度達到10000級。室內溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超凈臺的潔凈度應達到100級。
2、無菌室應保持清潔，嚴禁雜物，防止污染。
3、嚴格防止所有滅菌設備和培養基受到污染，被污染者應停止使用。
4、無菌室應配備工作濃度的消毒劑，如5%甲酚溶液、70%酒精、0.1%溴潔爾敏溶液等。
5、無菌室應定期用適當的消毒劑進行消毒清潔，確保無菌室的潔凈度符合要求。
6、所有需要帶入無菌室的儀器、器具、盤子等物品，應包扎嚴實，并采用適當的方法進行滅菌。
7、進入無菌室前，工作人員必須用肥皂或消毒液洗手，然后在緩沖間更換專用工作服、鞋帽、口罩和手套（或用70%乙醇再次擦手）。
8、使用無菌室前，必須打開無菌室紫外線燈照射滅菌30分鐘以上，同時打開超凈臺進行吹氣。手術后應及時清理無菌室，并用紫外線燈消毒20分鐘。
9、微生物無菌檢測前，試品外包裝應保持完好，不得打開，以防污染。檢查前，用70%酒精棉球對外表面進行消毒。
10、每次操作時應做陰性對照，檢查無菌操作的可靠性。
11、吸菌液時，必須用耳球吸。不要用嘴直接接觸吸管。
12、微生物無菌檢測前后，接種針必須進行火焰燃燒消毒，待培養物冷卻后才能接種。
13、吸管、試管、培養皿等帶有菌液的器皿，用含5%來蘇爾溶液的消毒桶浸泡消毒，24小時后取出清洗。若菌液灑在桌面或地面上，應立即用5%石炭酸溶液或3%來蘇爾溶液將其傾倒在污染處至少30分鐘后再進行處理。工作服、帽子被菌液污染時，應立即脫下，高壓蒸汽滅菌后清洗。
15、所有帶有活菌的物品必須經過消毒后才能在水龍頭下清洗。嚴禁污染下水道。每個月應在無菌室檢查菌落數。打開超凈工作臺后，取數個內徑為90mm的無菌培養皿，注入約15ml溶化并冷卻至約45℃無菌操作的營養瓊脂培養基，放入30～35℃培養箱中48凝固后數小時，取3～5塊板分別放在工作位置的左、中、右。開蓋暴露30分鐘后，放入30～35℃培養箱中48小時，取出檢查。100級潔凈區平板雜菌平均數不得超過1個菌落，10000級潔凈室平均菌數不得超過3個菌落。超過限值時，對無菌室進行*消毒，直至重復檢查符合要求。
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