單細胞鋪板是細胞實驗中最常見又必須掌握的一門技術,看似簡單,我們卻經(jīng)常遇到:如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象,導致我們只能扔掉,重新鋪板。既耽擱時間又浪費了細胞及培養(yǎng)板等資源。
單細胞鋪板要鋪成那種很均勻的單層細胞,手法如下:
1、細胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基,放入孵箱中放置10-20min;
2、在滴入細胞時,細胞板子與通風櫥有一定的角度,沿著板壁的孔邊緣滴入;
3、滴入后,呈“8”字方法搖晃5-8次;4、置于水平臺上,放置10-20分鐘;5、放入孵箱。
其實單細胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻,比如做免疫熒光時,因為這個樣子可以同時檢測到單個細胞的形態(tài),另外又可以照一點低倍的用作于統(tǒng)計,所有的細胞都在一個環(huán)境中。特別說明一下:這里的多也只是相對于多,細胞也是單層的。
鋪細胞時要注意手法如下:
1、細胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗,直接從邊上滴入混有細胞的培養(yǎng)基;
2、放置30s-1min后,前后搖晃5-8次;
3、放在水平臺上靜置2-5min;
4、放入孵箱。
一般在提取蛋白或者提取RNA的時候有時會這樣鋪板,因為有些細胞刮刀不好用,沒有辦法刮到周圍的,想要鋪中間多,周圍少的板子,手法如下:
1、細胞板子不需要提前潤洗,從中間滴入進去后;
2、把板子朝一個方向順時針或者逆時針旋轉(zhuǎn)3-5圈;
3、水平臺上靜置2-5min;
4、放入孵箱。
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