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WB蛋白質(zhì)印跡實驗(Western Blot, WB)樣本采集流程

來源:上海珂淮儀器有限公司   2022年04月14日 14:38  

WB蛋白質(zhì)印跡實驗(Western Blot, WB)樣本采集流程


一般為了提取到足夠的蛋白以及更容易地提取蛋白,需要準備足夠量的樣本,要求樣本量為細胞>10°個,組織>30mg,菌體濕重>10mg,植物>100mg,血清>50uL。蛋白提取的原則:低溫快速,裂解充分。細胞樣本;一般樣本為1×10° ~1×10個細胞


蛋白質(zhì)印跡(Western Blot, WB))又稱為免疫印跡(Immunoblot),是利用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)將樣品中分子量大小不同的蛋白分開,然后通過電轉(zhuǎn)移的方法將凝膠中的蛋白定量地遷移并幾乎原位復(fù)制、固定到固相膜上,再利用抗原、抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),特殊的抗體標記技術(shù)以及相應(yīng)的檢測方法,進而對目的蛋白進行定性、相對定量檢測的技術(shù)。WB實驗流程分為樣本采集,蛋白樣品制備,上樣,凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉,一抗孵育,洗膜,二抗孵育,洗膜,顯色(信號檢測)。一般為了提取到足夠的蛋白以及更容易地提取蛋白,需要準備足夠量的樣本,要求樣本量為細胞>10°個,組織>30mg,菌體濕重>10mg,植物>100mg,血清>50uL。蛋白提取的原則:低溫快速,裂解充分。細胞樣本;一般樣本為1×10° ~1×10個細胞,根據(jù)細胞量多少或不同細胞中蛋白含量的多少所加裂解液的量也不相同,一般1×10°個細胞,加裂解緩沖液100~200uL,具體實驗操作時參照以上比例,可進行適當(dāng)調(diào)整。

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