免疫組化中，組織在福爾馬林或者其他固定液的固定過程中，經常會出現蛋白質交聯而引起的抗原決定簇封閉，極大的降低抗原的檢出率和假陰性現象。此外，臨床病理診斷中，免疫組化的應用廣泛，因此抗原修復成為了免疫組化極其重要的一環。不同的抗原，采取不同的適宜的抗原修復方法，才能獲得的清晰、有效的結果。一般情況下，抗原修復的方法主要有三大類：高溫高壓修復法、微波加熱修復法、酶消化法。那我們又該以何種方法來選擇呢？

絕大多數細胞質抗原不做任何修復，一般也能獲得相對穩定的染色結果。但采取一些抗原修復方法，可以是抗原決定簇釋放的更加充分，進一步提高結果的可靠性和敏感性。所以我們一般采取的是強度適中，反應相對溫和的抗原修復方法。推薦使用微波修復法。

推薦的方法：微波加熱修復法

推薦的修復液：常用檸檬酸鹽緩沖液（pH=6.0）

實驗過程：微波高溫加熱 2 min（見微小波動，溫度在 90～95 ℃）后，立即轉為保溫 8 min 待緩慢降至室溫，用蒸餾水沖洗 2 次，加入 3% H2O2 8 ~10 min，在用蒸餾水沖洗 2 次，放入 PBS 中并進入下一步驟。（提示：在實際的修復試驗中，我們還要控制好修復時間，時間過長容易導致過修復、組織破壞和非特異性反應增強等不利影響）

絕大多數細胞膜抗原如果不做任何修復，它的顯色結果相對于細胞質抗原要微弱一些。主要是因為他的位置靠外，容易和固定液的甲醛發生交聯反應，無論是形成醛鍵還是羧甲基，都會造成蛋白構象的改變，遮蔽抗原決定簇與抗體連接。所以在細胞膜抗原修復的過程中，這個修復強度要稍微大一些，我們可以選擇微波加熱或者高壓修復（如果微波修復效果不好可以選擇）。如果是在實驗室做實驗，保守的選擇微波加熱修復，不過，對于時間和溫度的控制要稍微加長，溫度也可以略微高一些。

推薦的方法：微波加熱修復法

推薦的修復液：檸檬酸鹽緩沖液（pH=6.0）或 EDTA（pH=8.0 或 9.0），通常EDTA緩沖液的修復效果要優于檸檬酸鹽緩沖液，國外很多實驗室傾向于應用 DTA（pH=8.0 或 9.0）來修復。

實驗過程：微波高溫加熱 3 min（加熱到沸騰，95～100 ℃，一定要保證里面有充足的修復液，防止干片）后，立即轉為保溫 15 min 待緩慢降至室溫，用蒸餾水沖洗 2 次，加入 3% H2O2 8～10 min，在用蒸餾水沖洗 2 次，放入 PBS 中并進入下一步驟。（提示：在實際的修復試驗中，我們還要控制好修復時間，時間過長容易導致過修復、組織破壞和非特異性反應增強等不利影響）

細胞核抗原處在細胞的最核心位置，它的修復難度要大于細胞質抗原和細胞膜抗原。幾乎所有的的細胞核抗原需要應用高壓 120 ℃ 熱修復才可以達到理想的效果，使用其他方法都很難見到不錯的效果。由于高壓熱修復的強度要大一些，本身容易脫片，所以我們在實驗的時候要做好切片的固定，這個有很多方法可以實現，比如烤片的時間控制、添加一些切片的粘合劑等等，大家結合自己的實驗來安排。關于修復液的選擇，如果目的抗原真的很難修復，可以選擇 pH=8.0 或 9.0 的 EDTA 緩沖液。有文獻描述說pH的大小與抗原修復效果成正比，這是因為在加熱或者液體中的堿性物質可以引起蛋白質分子之間的曼尼希反應，非常容易破壞蛋白質分子的交聯。可專門用來針對那些有難度的細胞核抗原的修復，也就是說 EDTA 緩沖液的修復效果要優于檸檬酸鹽緩沖液，國外很多實驗室也傾向于應用DTA（pH=8.0 或 9.0）來修復（有時間最好兩種修復液都做一下，加深感受，有助于提升實驗技能）。

推薦的方法：高壓熱修復法

推薦的修復液：檸檬酸鹽緩沖液（pH=6.0）或 EDTA（pH=8.0 或 9.0）

實驗過程：高壓鍋加熱到噴氣開始再加熱 2 min（一定要保證里面有充足的修復液，防止干片）后，立即將高壓鍋端離火源，一定要等蒸汽排放完成以后，再打開鍋蓋，待緩慢降至室溫，用蒸餾水沖洗 2 次，加入 3% H2O2 8 ~10 min，在用蒸餾水沖洗 2 次，待進入下一步驟。（提示：在實際的修復試驗中，我們還要控制好修復時間，時間過長容易導致過修復、組織破壞和非特異性反應增強等不利影響）

免疫組化中一些特殊類型的修復，都是一些經驗性的總結，比如 CD4/CD8/CD25/CD1a 需先用 3% H2O2 浸泡 8 min，后用蒸餾水沖洗兩次，再用高壓熱修復法進行修復。其染色結果就非常理想，反之陽性信號減少，陽性細胞也變少了。還有一些抗原修復以后反而假陰性大大增加。舉個例子 HBcAg 是乙肝病毒的核殼結構蛋白，是 HBV 的核心部分。黃建平等對其進行 3 種抗原修復的方法對比發現，不修復染色最好，高壓熱修復效果最差。原因是因為甲醛固定的是肝細胞，并沒有固定到乙肝病毒上。高溫高壓的修復，反而導致乙肝病毒的蛋白質變性，極大的影響了染色結果。對于特殊類型抗原的修復，是因為我們對抗原修復的機制研究尚不*，還有很多問題沒有搞清楚。這種方法的積累來源于實驗經驗的積累和汲取，所以鼓勵大家多看看相關類型文獻，可以幫助少走彎路。