反相填料常是以硅膠為基礎,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。 反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水,緩沖液與甲醇,已腈等混合物。 樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出,而極性弱的組份會在色譜柱上有 更強的保留。 常用的反相填料有YMC C18填料(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等。
聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要優點是在PH值為1~ 14均可使用。 相對與硅膠基質的YMC C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白 質等樣品的分離非常有效。 現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。
反相填料的較大特性是具有非常高的表面鍵合覆蓋率,是不同性質有機化合物分離的理想選擇。通過在生產過程中的嚴格控制,使之*封尾,對酸性和堿性以及螯合物樣品具有*的分離性能。反相填料采用自主開發的球形多孔硅膠生產工藝,并對硅膠的硅烷化反應進行了系統研究,建立起了制備球形液相反相填料的優化條件。所生產的球形多孔硅膠具有粒徑分布均勻,孔徑分布范圍窄,比表面積可控,表面官能團濃度高和機械強度高等特點,完滿足現代液相色譜的要求。
反相填料在干燥狀態下為透明無孔凝膠,但是通過有機溶劑溶脹后可以變成具有分子篩性能的多孔網狀結構,凝膠填料*溶脹后,孔徑和排阻極限由交聯度和洗脫劑決定。可以在苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、四氯化碳、二甲基甲酰胺酮及混合有機溶劑中溶脹分離。可用于親脂性多聚物和有機洗脫溶質的分子量、結構類似物體積排阻層析,也可以分析分子體積不同、具有相同化學性質的高分子同系物。
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