理解免疫分析的基本原理很容易。基于抗體的免疫分析系統(tǒng)的基本組成部分有三個(gè)：用于檢測(cè)和定量的抗原；針對(duì)這種抗原的特異性抗體；以及測(cè)量給定樣本中抗原量的系統(tǒng)。雖然這似乎是一個(gè)非常簡(jiǎn)單的系統(tǒng)，但在許多情況下，為了快速方便地進(jìn)行測(cè)量，還需要許多其他分析材料。下面就來(lái)看一下Enzo Life Sciences丨艾美捷的夾心ELISA&競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定原理。

一、Enzo Life Sciences丨艾美捷 免疫測(cè)定/夾心ELISA試劑盒

免疫測(cè)定分析，也稱為夾心ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)），使用兩種抗原特異性抗體捕獲或“夾心”在孔中檢測(cè)抗原。免疫計(jì)量分析顯示抗原濃度和底物反應(yīng)之間存在直接相關(guān)性。免疫計(jì)量分析通常使用涂在平板上的“捕獲”抗體結(jié)合感興趣的抗原。在第二次孵化期間，抗原被第二個(gè)抗體結(jié)合“檢測(cè)”抗體，也是抗原的特異性抗體。檢測(cè)抗體可以由二級(jí)抗體酶結(jié)合物結(jié)合，或者檢測(cè)抗體本身是酶結(jié)合物。當(dāng)向分析中添加顯色底物以顯色時(shí)，抗原濃度高的樣品比抗原濃度低的樣品產(chǎn)生更多信號(hào)抗原濃度，產(chǎn)生與樣本中抗原量成正比的信號(hào)。然后，這種相關(guān)性可用于從標(biāo)準(zhǔn)曲線推斷未知樣本中的抗原濃度。

二、Enzo Life Sciences丨艾美捷 競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒

在競(jìng)爭(zhēng)性酶免疫分析（EIA）中，樣本中的抗原與與報(bào)告酶結(jié)合的抗原競(jìng)爭(zhēng)有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。這就產(chǎn)生了抗原濃度和底物周轉(zhuǎn)率之間的反比關(guān)系。競(jìng)爭(zhēng)性EIA通常使用一種針對(duì)小分子量抗原的抗體，通常小于10000道爾頓。在孵化過(guò)程中，抗原含量高的樣品導(dǎo)致未標(biāo)記抗原的結(jié)合量大于結(jié)合抗原。當(dāng)向分析中添加顯色底物以顯色時(shí)，抗原濃度高的樣品產(chǎn)生的信號(hào)低于抗原濃度低的樣品，從而在樣品中的抗原濃度與分析中的顯色之間產(chǎn)生負(fù)相關(guān)。這種關(guān)系可用于從標(biāo)準(zhǔn)曲線推斷未知樣本中的抗原濃度。這種反應(yīng)是為數(shù)不多的用于小分子量抗原（如類固醇、藥物、脂質(zhì)和肽）的方法之一。

左圖：夾心ELISA實(shí)驗(yàn)：

將樣品加入到包裹有捕獲抗體的容器中，并孵育清洗微孔以去除未結(jié)合的分子添加檢測(cè)抗體并孵育以與抗原結(jié)合，形成“三明治”清除多余的檢測(cè)抗體加入二級(jí)抗體酶結(jié)合物并清洗。結(jié)合酶通常是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）

注：如果報(bào)告酶直接與檢測(cè)抗體結(jié)合，則可省略該步驟添加底物并孵育以產(chǎn)生信號(hào)讀板器中的測(cè)量信號(hào)。

右圖：競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn)：

將樣品加入到涂有抗物種抗體的容器中酶結(jié)合抗原加入樣品中，將捕獲抗體加入培養(yǎng)皿中并孵育。樣本中的抗原和酶結(jié)合抗原競(jìng)爭(zhēng)與捕獲抗體的結(jié)合。包被在孔中的抗物種抗體結(jié)合捕獲抗體。清洗微孔以去除多余的抗體和酶結(jié)合抗原，添加基板以產(chǎn)生信號(hào)讀板器中的測(cè)量信號(hào)。

艾美捷科技是Enzo Life Sciences的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。