多聚酶二抗介紹

過氧化物酶標(biāo)記的抗體方法于 1968 年推出，是大多數(shù)臨床和研究中石蠟包埋組織抗體的實踐應(yīng)用（Nakane,1968）。然而常規(guī)的二抗-HRP 結(jié)合物每個 IgG 分子上最多能結(jié)合 3 個 HRP 分子。這種結(jié)合物的分子量能滿足常規(guī)的 WB 和 Elisa 實驗要求，但在檢測目標(biāo)蛋白分子量含量很低時，如果不通過額外的步驟來放大信號，會降低檢測靶標(biāo)所需的靈敏度。IHC 實驗時尤為明顯。

在過去的幾十年中，IHC 實驗用試劑和實驗方案上的改進(jìn)增加了這套檢測系統(tǒng)的靈敏度。基于酶-抗-酶免疫復(fù)合物技術(shù)（PAP 和 APA-AP）（Sternberger et al., 1970）和標(biāo)準(zhǔn)的抗生物素蛋白 / 鏈霉抗生物素蛋白-生物素-復(fù)合物技術(shù)（ABC 或 SABC）以及標(biāo)記的鏈霉素-生物素（LSAB）技術(shù)，再通過多聚酶結(jié)合，這種新方法使檢測抗原的能力比之前提高好幾倍。

然而 PAP 和 APA-AP 方法會形成巨大的骨架結(jié)構(gòu)導(dǎo)致檢測物質(zhì)體積過大而容易發(fā)生遮蔽和位阻現(xiàn)象（如細(xì)胞核抗原的檢測），使其難以進(jìn)入到組織樣品內(nèi)部而導(dǎo)致靈敏度降低（for review see: Shi et al., 1999 and citations therein）。

人體內(nèi)很多組織分布有生物素（維生素 H），它可以和 ABC/SABC 結(jié)合產(chǎn)生非特異性染色。同時為了減少實驗步驟，加強信號，需要一種容易滲透到組織內(nèi)部，降低非特異反應(yīng)，并能提高信號強度的檢測系統(tǒng)來代替?zhèn)鹘y(tǒng)的方法。

FineTest® IHC Kits 采用了一種新的多聚酶二抗系統(tǒng)（包括 poly-HRP 羊抗兔 IgG 和 poly-HRP 羊抗小鼠 IgG）。更多的酶可以通過鏈接臂結(jié)構(gòu)鏈接到單分子的抗體上，形成最合適的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，從而在免疫組化實驗中提高信號強度，同時簡化了實驗程序。

各檢測系統(tǒng)的差異：

顯色對比試驗

原理示意圖：

IHC 測試結(jié)果
分別進(jìn)行了高濃度和低濃度的目標(biāo)抗原 IHC 實驗。其中一抗，多聚酶二抗和 DAB 試劑盒均來自FineTest®。
較高濃度的目標(biāo)抗原：

 較低濃度的目標(biāo)抗原：

人體腎臟組織（A,D,F,N)，人體肝癌組織（B,E），人體乳腺癌組織（C,J,K）, 人體結(jié)腸癌組織（H,I,L,M) 和大鼠心臟組織（G）。多聚酶二抗 Poly-HRP Goat anti rabbit IgG 和 Poly-HRP Goat anti mouse IgG 按照 1:100 稀釋。DAB 染色 10 分鐘，細(xì)胞核用蘇木-精復(fù)染。

陰性對照試驗

人體心臟組織（1），人體結(jié)腸癌組織（2），大鼠肝臟組織（3），人體乳腺癌組織（4）。一抗為陰性血清，多聚酶二抗 Poly-HRP Goat anti rabbit IgG 和 Poly-HRP Goat anti mouse IgG 按照 1:50 稀釋。DAB 染色 10 分鐘，細(xì)胞核用蘇木-精復(fù)染。

總結(jié)
使用多聚酶二抗做 IHC 實驗，獲得了明顯放大的信號，未出現(xiàn)非特異性結(jié)合，并且大大簡化了實驗程序。