四用紫外分析儀中幾種主要光源作用,利用我們公司的暗箱式紫外分析儀舉例來講。
有三組光源,白光光源一組,紫外光源兩組分別是365nm和254nm。
首先是白光光源,通常作為系統(tǒng)照明光源使用,即放置或調(diào)整DNA膠或蛋白膠位置,或在對鏡頭調(diào)整聚焦時使用,當(dāng)然在對非透明材質(zhì)的蛋白膠或其他成像物質(zhì)進(jìn)行成像時也需開啟反射白光。
二個是:254nm這是一個比較常用的檢測波長,大多數(shù)含有苯環(huán)的有機(jī)化合物在此有吸收,不過這樣它的特征性就不強了!而且會引來很多干擾,所以還是建議對不同物質(zhì)選擇不同的檢測波長,一是提高靈敏度和選擇性,二是減少不必要的干擾。無色的成分在245-365nm的紫外燈下檢視可以看到在這個范圍內(nèi)存在光吸收的成分所發(fā)出的熒光。
三個:365nm光源主要適用于制備觀察以及切割條帶,減少對DNA的破壞,并減小對人的傷害。
紫外反射燈源,使用并不廣泛,只是在非透明材質(zhì)的DNA跑膠載體如紙層析等的成像才需要使用。往往比較常用的還是透明的瓊脂糖凝膠與聚丙烯酰胺凝膠,透射光源*可以滿足。
還有一個不常用的302nm波長,主要用于DNA膠拍攝,由于DNA常用的熒光染料是EB(即Ethidiumbromide,溴化乙錠),而用標(biāo)準(zhǔn)302nm紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號,可用拍攝到。
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