1. 取樣前準備工作

1.1 依據檢測區(qū)域的取樣點數，按照《培養(yǎng)基配制、滅菌標準操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。

1.2 在超凈工作臺內，以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15mL的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。

1.3 將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內于30～35℃培養(yǎng)48小時。取出逐個檢查，確認無菌落數后即可使用。

1.4 采樣：將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與QA人員取樣。

2. 儀器、設備和培養(yǎng)基

2.1 所用的儀器、設備和培養(yǎng)基

2.1.2 浮游菌采樣器

2.1.3 培養(yǎng)皿（φ90mm×15mm）

2.1.4 培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）

2.1.5 恒溫培養(yǎng)箱

2.2  儀器、設備、培養(yǎng)基的要求

    浮游菌采樣器

2.2.1 浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。

2.2.2 應嚴格按儀器說明書的要求進行操作。

2.2.3 采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性，檢驗項目有：定時器，轉盤轉速，流量計。

2.2.4 每次測試前應先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調節(jié)流量計和定時器。

2.2.5 空氣采樣量根據需要選定，已知采樣器的流量（L/min）,設定采樣時間（min）兩者相乘即得采樣量（L）。

2.2.6 采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造，采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑，采樣管的長度應根據測定點的高度定，盡量減少彎曲。

3. 測試方法

3.1  測試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。

3.1.1  采樣器進入被測房間前先用消毒劑滅菌。

3.1.2  用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

3.1.3  采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。

3.1.4  采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對采樣管的外壁、內壁進行消毒，應將管中的殘留液倒掉并晾干。

3.1.5  采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。

3.2  采樣程序

3.2.1  儀器經消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調好流量、轉盤轉速。

3.2.2  關閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調節(jié)采樣品縫隙高度。

3.2.3  置采樣器于采樣點后，開啟采樣器、轉動定時器，根據采樣量設定采樣時間。

4. 測試規(guī)則

4.1 測試狀態(tài)

4.1.1  浮游菌測試前微生物限度檢查室已經消毒過。

4.1.2  測試狀態(tài)為靜態(tài)測試，并在報告中注明測試狀態(tài)。

4.2 測試人員

4.2.1  測試人員必須穿戴符和被測環(huán)境級別的工作服。

4.2.2  靜態(tài)測試時，室內人員不得多于2人。

4.3 測試時間

4.3.1  對單向流，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。

4.3.2  對非單向流，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。

4.4  最少采樣點數目及其布置，最小采樣量，見下表：

4.4.1  工作區(qū)測點位置離地0.8m～1.5m左右，送風口測點位置離開送風面30cm左右；可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。4.4.2  每個采樣點一般采樣一次。4.4.3  對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。4.4.4  布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口1m以上。4.4.5  采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側。
5. 培養(yǎng)

取樣結束后將平皿復倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內于30～35℃培養(yǎng)48小時。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。
6. 菌落計數

6.1 用肉眼直接計數，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。

6.2 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時，仍以2個或2個以上的菌落計數。計數：培養(yǎng)結束，將上述培養(yǎng)后的平皿取出，逐個點計菌落數，必要時用放大鏡檢查，并記錄。
7. 結果計算

7.1 平均菌落數的計算見下式：

式中：m 為該房間（或區(qū)域）的平均菌落數；          

m1、m2‥‥‥mn 為該房間（或區(qū)域）各取樣點的菌落數；          

N 為培養(yǎng)皿總數。
8. 結論

8.1 潔凈室（區(qū)）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。8.2 若某潔凈室（區(qū)）的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結果必須合格。