產品貨號: K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000

產品規格: 100T/500T/1000T/3000T

產品品牌:Zeta Life

產品概述：

CellCounting Kit簡稱CCK試劑盒，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其他MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點：

-CCK被線粒體內的脫氫酶還原成的formazan是水溶性，不需要有特定的溶解液來溶解，而WST和XTT、MTS產生的formazan都不是水溶性的，因而可以省去后續溶解步驟。

-CCK比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定。

-CCK和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

CCK毒性：CCK和其他檢測方法相比，對細胞幾乎無毒性，不傷害細胞，細胞可重復利用。

CCK應用：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏實驗。

操作說明：

一、制作標準曲線(測定細胞具體數量時)

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2、按比例(例如：1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3、接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK試劑培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸)，OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK后的培養時間)。

二、細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液(100ul/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(在37℃，5% CO2的條件下)。

2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數)。

3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

三、細胞增值-毒性檢測

1、在96 孔板中配置100ul的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在37℃，5% CO2的條件下)。

2、向培養板加入10ul不同濃度的待測物質。

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如：6、12、24或48小時)。

4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數)。

5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

7、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養基(除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基)，去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

備注：

① 建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK試劑后的培養時間。

② 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入

CCK試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值讀數。

③ 白細胞可能需要培養較長時間。

④ 當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000個/孔(100ul培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100ul培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK溶液。

⑤ 如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。

⑥ 培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

活力計算：

細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)]×100

A(加藥)：具有細胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白)：具有培養基和CCK溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A(0加藥)：具有細胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

保存條件：

4℃避光保存，有效期一年。

美國Zeta Life公司成立于1989年，是無血清細胞培養基DMEM/F12主要完成人，有三十多年的胎牛血清、無血清細胞培養基、以及干細胞、免疫細胞及腫瘤細胞等多種不同類型哺乳動物細胞的無血清培養液生產經驗；也是目前世界胎牛血清、無血清培養基大的供應商之一；每批血清均有完整的血源證明文件、獸醫師檢驗證明及品質測試報告；

2018年美國Zeta Life公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區聯合開發活細胞、活體動物體轉染試劑，此技術成為蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發及生產的主要關鍵技術之一。