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應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)

來源:研域生物技術(shù)(上海)有限公司   2022年01月18日 08:56  

       目前,分子生物學(xué)正在并終肯定會讓我們對整個生命科學(xué)有一個全面而*的認識,其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。操作步驟  

      方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 


  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 


  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 


  3. 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。 


  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 


  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 


  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。 


  方法二 用于檢測未知抗體的間接法: 


  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 


  每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。 


  ↓ 


  加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔 


  中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照) 


  ↓ 


  于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml, 


  37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。 


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