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單細胞分離廣泛應用于眾多研究領域

來源:Bio-Techne   2021年11月29日 15:32  

  單細胞分離對于很多應用場景如,單細胞測序,單克隆培養等而言是關鍵的前處理步驟,殊不知單細胞分離的前處理步驟也有很多需要注意的地方。下面我們就來了解一下,為了提高單細胞分離的效率和效果,都有哪些小竅門。

       單細胞分離用于區分碎片、死細胞和活細胞,然后可以根據操作流程分離單個活細胞,為了去除細胞結團,在染色之后可以用40um左右的細胞篩網過濾細胞,盡量保證在上樣的時候樣本都是單個細胞。

  作為對照,我們采用細胞密度進行手動有限稀釋法鋪板。然后,用顯微鏡在明場下觀察每個孔的細胞(或者微球)的數量,同樣的實驗持續7天,每天做一組對比實驗,取平均值,通過統計孔板中單細胞、兩個細胞和空孔的數量來衡量儀器的分選效率,可通過差速離心或密度梯度離心和過濾的方法,根據大小、形狀和密度對細胞進行人工分離。
  例如,通過各種密度梯度離心,可以從外周血或骨髓中分離出單核細胞,使用熒光染料可以從死細胞或凋亡細胞中標記和分離活細胞,富集細胞亞群或稀有細胞類型時,可將標記抗體基于磁珠的分離方法相結合進行陽性/陰性篩選。多種因素將影響方法的選擇,包括樣本類型、可用抗體種類和實驗設計。
  它可以快速識別可能會使下游步驟變得復雜的碎片、細胞雙聯體和細胞聚集物,更重要的是,準確的細胞計數對于實現單細胞分離過程的目標細胞通量至關重要,可以使用顯微鏡和血細胞計數器進行手動細胞計數,也可以使用自動化系統進行準確的細胞計數,采集細胞懸液的明場圖像,根據細胞特征(例如大小、亮度和圓度)生成直方圖進行更詳細的檢查。
  在以上步驟完結之后,我們就能得到一個好的單細胞懸液了。最后我們用Namocell單細胞分離儀完成后面的單細胞分離工作,最快可以在1min以內完成96孔板的鋪板,6min以內完成384孔板的鋪板,并且整版單細胞效率高達90%左右。

鋪板效率.jpg


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