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單細(xì)胞鋪板的有關(guān)經(jīng)驗(yàn),來一起了解一下吧

來源:Bio-Techne   2021年11月20日 14:15  

        單細(xì)胞鋪板大概是我們常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)在我們常用的方法就是手動(dòng)的有限稀釋,但有時(shí)候鋪得不是很均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂。為了做好手動(dòng)的有限稀釋單細(xì)胞鋪板,我們需要注意以下事項(xiàng):

  盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對(duì)于易于消化的細(xì)胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時(shí)間。
  96孔板一般以100微升每孔接種,直接用100微升移液器吸取細(xì)胞懸液,沿孔壁(稍離開一點(diǎn)孔底即可,不要離底太高)直接接入,移液器不需*打到,輕輕按下即可,每鋪完一行換一次槍頭同時(shí)輕輕混勻細(xì)胞懸液。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。
  6孔板、12孔板或24孔板,可采用將每個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔依此類推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒有96孔板好掌握,效果沒有96孔板好。
  培養(yǎng)瓶里面加好細(xì)胞以后(比如傳代好/分好細(xì)胞以后),先順時(shí)針搖晃3次,馬上逆時(shí)針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復(fù)延X軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。

     看來為了做好單細(xì)胞分離,手動(dòng)有限稀釋難度還是挺大的。

       Namocell單細(xì)胞分離儀能快速、高效、輕柔地完成96孔板的單細(xì)胞鋪板工作,將制備好的單細(xì)胞懸液加入到儀器,一分鐘左右就能鋪完1塊96孔板,并且整版單細(xì)胞的效率能達(dá)到90%左右。

       以上就是單細(xì)胞鋪板的有關(guān)經(jīng)驗(yàn),希望對(duì)您有所幫助


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