常見(jiàn)問(wèn)題之HIS標(biāo)簽蛋白沒(méi)有被洗脫下來(lái)

來(lái)源：安諾倫（北京）生物科技有限公司 2021年11月24日 09:21

蛋白掛柱后洗脫不下來(lái)主要是因?yàn)榈鞍缀椭咏Y(jié)合能力太強(qiáng)或者洗脫條件太溫和，我們可以從以下幾方面考慮解決問(wèn)題。

1、洗脫條件太溫和：重新摸索洗脫條件，增加緩沖液中咪唑濃度或者適當(dāng)降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分（換成tris-HCl緩沖液）。

2、蛋白在柱子中沉淀：適當(dāng)降低上樣量或蛋白濃度，用咪唑線(xiàn)性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度，或者在變性的條件下洗脫（加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍）。

3、非特異性的疏水或者其他作用：在洗脫液中加非離子的添加劑（例如0.2%的Triton X-100）或者增加NaCl的濃度。

4、蛋白和柱子接觸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：可以減少蛋白和柱子的接觸時(shí)間。

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