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Vero細(xì)胞培養(yǎng)接種工藝技術(shù)

來源:蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司   2021年11月23日 14:16  

Vero細(xì)胞近年來作為新時(shí)代制藥產(chǎn)業(yè)的熱門細(xì)胞,成為轉(zhuǎn)基因、蛋白、抗體類制藥企業(yè)普遍使用使用的載體工具。使用細(xì)胞生物反應(yīng)器進(jìn)行Vero細(xì)胞的規(guī)模化增殖的接種工藝如下:


一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
細(xì)胞∶Vero 細(xì)胞(ATCC級別的 )、DMEM培養(yǎng)基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌濾膜、CT-3微載體、2L實(shí)驗(yàn)室生物反應(yīng)器,5L搏旅/楚怡細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器、搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、水浴鍋。

BioCore QC臺式細(xì)胞生物反應(yīng)器(玻璃).jpg

二、接種實(shí)驗(yàn)方法
1.微載體的預(yù)處理和滅菌: 接種實(shí)驗(yàn)前的微載體需要用無鈣、鎂離子的PBS磷酸鹽緩沖液進(jìn)行吸脹、洗滌,之后進(jìn)行高壓滅菌處理,工藝控制參數(shù)為:吸脹質(zhì)量濃度不超過50 g·L-1,滅菌溫度121 ℃,20 min。


2.轉(zhuǎn)瓶接種操作:
將培養(yǎng)瓶內(nèi)的 Vero 細(xì)胞接種于500ML的轉(zhuǎn)瓶內(nèi),CT-3 微載體濃度為 3g/L,并加入適量的混合牛血清的DMEM培養(yǎng)基,此時(shí)接種密度以2.0×10°cells/mL為宜。
在微載體細(xì)胞生長過程中,可適當(dāng)補(bǔ)加微載體 2g/L,使微載體濃度達(dá)到 5g/L即可接種在5L細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中作為種子細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。


3.規(guī)模擴(kuò)培接種操作
當(dāng)細(xì)胞生長到達(dá)一定密度時(shí),將細(xì)胞及新的微載體一起轉(zhuǎn)入大容積的微載體培養(yǎng)養(yǎng)反應(yīng)器中,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。此過程的工藝參數(shù)為:溫控: 37士0.1℃,溶解氧為 50%空氣飽和度,攪拌器的轉(zhuǎn)速維持在20~32 r/min即可。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1.1×10'cells/mL時(shí),即可進(jìn)入下游環(huán)節(jié)進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)。

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介于國外生物反應(yīng)器成本高昂,售后服務(wù)不便,型號固定、貨期長等因素,我國自主研發(fā)設(shè)備生產(chǎn)的生物反應(yīng)器目前已廣泛應(yīng)用于制藥生產(chǎn)、新藥開發(fā)、蛋白研發(fā)、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等環(huán)節(jié),一些國內(nèi)生物反應(yīng)器專業(yè)生產(chǎn)商甚至可根據(jù)客戶要求的尺寸進(jìn)行定制化操作,比如搏旅除生產(chǎn)固定型號規(guī)格外,還可以根據(jù)客戶要求定制不同級別、規(guī)格的生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐主要用于微生物培養(yǎng)、種子制備、浮細(xì)胞培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)等,實(shí)現(xiàn)了廠商直供,一罐多用,滿足不同的用戶需求。


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