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同位素標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)

來(lái)源:上海徠同生物科技有限公司   2021年11月22日 15:49  

同位素標(biāo)記定量


iTRAQ
isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation&TMTTandem Mass Tags)分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù),利用多種同位素試劑標(biāo)記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側(cè)鏈基團(tuán),不同分子量的試劑對(duì)不同來(lái)源的樣品進(jìn)行標(biāo)記從而實(shí)現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組的比較。

               

iTRAQ/TMT試劑由三部分組成:報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和反應(yīng)基團(tuán)。反應(yīng)基團(tuán)形成2-10種等質(zhì)量同位素標(biāo)簽。iTRAQ/TMT試劑標(biāo)記酶解后的肽段,可與氨基酸N端及側(cè)鏈的伯胺基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)。在一級(jí)譜圖中,來(lái)自于不同樣本的同一肽段,標(biāo)記后表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。在二級(jí)譜圖中,報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)和反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂,帶不同同位素標(biāo)簽的同一肽段產(chǎn)生質(zhì)量不同的報(bào)告離子,根據(jù)報(bào)告離子的豐度可獲得樣本間相同肽段的定量信息,再經(jīng)過(guò)軟件處理得到蛋白質(zhì)的定量信息。

 

iTRAQ實(shí)驗(yàn)步驟

 

1. 樣品制備

2. 酶解消化

3. iTRAQ標(biāo)記:

4. 樣本混合/肽段分級(jí)

5. 數(shù)據(jù)處理及生信分析

 

 

結(jié)果展示

 

圖片1.png


                                                                                                                                火山圖

 

實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

 

1. 實(shí)驗(yàn)周期:6周左右

2. 交付標(biāo)準(zhǔn):蛋白定量結(jié)果、鑒定結(jié)果、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、生信分析結(jié)果(GO分析、KEGG分析等等)

 

需確認(rèn)的信息

 

1. 樣本的種屬

2. 樣本的類型(組織or細(xì)胞or血液)

3. 樣本的數(shù)量及分組

4. 分析要求

 


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