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介紹兩種不同的支原體檢測試劑盒

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2021年10月27日 11:54  
  在細(xì)胞培養(yǎng),特別是傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體污染率達到15-35%。支原體的侵染會引起細(xì)胞功能和基因表達的嚴(yán)重改變,并造成持續(xù)危害。由于支原體污染會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的可靠性、重復(fù)性和一致性,對支原體的常規(guī)檢測非常重要。
  傳統(tǒng)的支原體檢測方法很耗費時間,通常需要一天至數(shù)周,而且操作比較繁瑣,度不高。
  中國藥典給定的支原體標(biāo)準(zhǔn)檢測方法有兩種:培養(yǎng)法和DNA染色法。培養(yǎng)法方法簡單,假陽性率低,但樣品需要量高,耗時20天左右,時間漫長。DNA染色法結(jié)果直觀,假陽性率低,但需要熒光顯微設(shè)備,實驗操作復(fù)雜。
  能否找到一種省時、省力且性高的方法檢測支原體污染呢?
  目前,市場上具有多款支原體快速檢測試劑盒,我們選取了其中兩種常見的品牌,就其檢測原理與操作進行一下比較。
  一、美國CLARKBioscience品牌一步法檢測試劑盒
  美國CLARKBioscience公司研發(fā)的一步法支原體檢測試劑盒One-stepQuickcolorMycoplasmaDetectionKit,利用等溫擴增的方法,可檢測7種常見支原體的基因。
  該檢測方法與PCR方法類似,檢測過程中,只需取少量細(xì)胞培養(yǎng)上清,及一個能控制溫度的水浴鍋或恒溫金屬浴,其擴增產(chǎn)物的顏色可通過肉眼直接觀察判斷,整個過程需要1小時左右。
  該方法對儀器的要求比較低,理論上靈敏度比較高。缺點在于檢測的支原體種類太少,目前已發(fā)現(xiàn)的近200種支原體,只能檢測其中的7種,檢測范圍太窄,也不符合國家藥典的規(guī)定。而且肉眼觀察結(jié)果比較主觀,如果實驗員剛好有色盲或色弱的問題,此種方法放棄。
  二、美國Lonza品牌生物發(fā)光法檢測試劑盒
  美國Lonza品牌的MycoAlertTM和升級的MycoAlertTMPLUS支原體檢測試劑盒,采用生物發(fā)光的方法,檢測支原體酶活性。其檢測的支原體酶廣泛存在于180多種支原體中,而不存在于真核細(xì)胞中。
  該方法利用支原體酶的特定活性,進行選擇性的生物化學(xué)檢測。當(dāng)支原體被溶解后,釋放的酶與支原體檢測試劑盒中提供的底物發(fā)生催化反應(yīng),將ADP轉(zhuǎn)化成ATP,參與生物發(fā)光反應(yīng),并可通過分光光度計測定。如果樣品添加底物后讀數(shù)上升,表明存在支原體污染。整個實驗過程需要20分鐘左右。
  該方法能夠檢測的支原體種類比較全,檢測結(jié)果量化,容易判斷,耗時短。缺點是需要配置發(fā)光儀或多功能酶標(biāo)儀,靈敏度也可能低于擴增法。

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