牛津杯在做抑菌試驗時的操作步驟如下：

將已滅菌的瓊脂培養基加熱到*融化，倒在培養皿內，每皿15ml（下層），待其凝固。此外，將融化的PDA培養基冷卻到50℃左右混入試驗菌17號，將混有菌的培養基5ml加到已凝固的培養基上待凝固（上層）。

以無菌操作在培養基表面直接垂直放上牛津杯（內徑6mm、外徑8mm、高10 mm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），輕輕加壓，使其與培養基接觸無空隙，在杯中加入待檢樣品（發酵液），杯子一般可以裝240微 升,勿使其外溢。加滿后置37℃培養16-18小時，觀察結果，抑菌圈用尺直接量就可以。在培養中,一方面試驗菌開始生長，另一方面抗生素呈球面擴散，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠抗生素濃度越小。隨著抗生素濃度減小，有一條抑菌濃度帶，在帶范圍內，菌不能生長，而呈透明的圓圈，這就叫“抑菌圈”。抗生素濃度越高，抑菌圈越大。