鼠Streptavidin-HRP試劑盒（帶DAB顯色液）說(shuō)明書(shū)

     SPMouseHRPKit（DAB）

     鼠Streptavidin-HRP試劑盒（帶DAB顯色液）

     

     Cat.No.K2068

     保存：2-8℃

     組分說(shuō)明

                  Cat.No.                                                  K2068     K2068A

                  KitSize                                                   3ml       18ml

內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉液（試劑1，白色液體）                      3ml       18ml

封閉用正常羊血清工作液（試劑2，白色液體）                      3ml       18ml

生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗工作液（試劑3，黃色液體）         3ml       18ml

HRP標(biāo)記的鏈霉親和素（試劑4，紅色液體）                          3ml       18ml

DAB-A液（20×）                                                                  250μl       1ml

DAB-B液（1×）                                                                    5ml       20ml

                            *本試劑盒僅適用于一抗為鼠源抗體的IHC實(shí)驗(yàn)

     產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      本試劑盒根據(jù)生物素（Biotin）與鏈霉親和素（Streptavidin）具有強(qiáng)親和力的原理設(shè)計(jì)。在鼠源的一抗與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后，本試劑盒中的生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗與一抗特異結(jié)合；二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記過(guò)氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結(jié)合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。HRP可以催化底物顯色，從而推斷待檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用優(yōu)化的標(biāo)記和純化技術(shù)，使得其染色有更高靈敏度和更低的背景，適合于檢測(cè)福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，以及冰凍切片、細(xì)胞爬片、新鮮制備的血涂片等。鼠Strept-avidin-HRP試劑盒適合與上海研謹(jǐn)生物即用型或濃縮型抗體配套使用。

     注意事項(xiàng)

     1.  以每張切片加入1滴（約50μl）計(jì)算，3ml可做60張切片，18ml可做360張切片。

     2.  對(duì)于內(nèi)源性生物素含量比較豐富的組織，使用本試劑盒時(shí)最好用內(nèi)源性生物素阻斷劑進(jìn)行封閉。

     3.  DAB工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液2-8°C避光1小時(shí)內(nèi)有效。

    實(shí)4.驗(yàn)過(guò)程中避免組織片干燥，因此各步孵育時(shí)工作液用量必需充足，保證*覆蓋組織樣本，且盡量在濕盒中進(jìn)行孵育。

    為5.獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件及試劑用量。

     6.  DAB為可疑致癌物，使用時(shí)請(qǐng)采取必要的防護(hù)措施。

     7.  本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體反應(yīng)或人體治療。  

使用方法

1.  常規(guī)處理欲檢測(cè)的石蠟或冰凍組織切片或細(xì)胞爬片等樣本。

1）組織切片或細(xì)胞爬片染色前處理：

a.石蠟切片

 脫蠟水化：60oC烤片1小時(shí)，二甲苯脫蠟二次，每次5分鐘；再依次浸入梯度乙醇（無(wú)水乙醇－無(wú)水乙醇－95% －85%－75%乙醇）和蒸餾水中各5分鐘水化。

b.冰凍切片和細(xì)胞爬片

 切片（或爬片）浸于0.01MpH7.4PBS洗滌3次×5分鐘。然后用0.1%TritonX-100覆蓋組織（或細(xì)胞）浸潤(rùn)15分鐘，0.01MpH7.4PBS洗滌2次×5分鐘。

2）石蠟切片的抗原修復(fù)：絕大大多數(shù)情況下，石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)都是適合的。

   修復(fù)工作液配制：1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液（IHC抗原修復(fù)液,100×)（Cat#：K0128），混勻即可。

   修復(fù)過(guò)程：修復(fù)液加入高壓鍋內(nèi)，待修復(fù)切片浸于修復(fù)液中（必需沒(méi)過(guò)組織），蓋上壓力鍋蓋，加熱至均勻噴汽，從噴汽開(kāi)始計(jì)時(shí)，1~2分鐘后壓力鍋離開(kāi)熱源，自然冷卻至室溫，取出切片，蒸餾水淋洗后，再用PBS（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分鐘。

2.滴加適量試劑1（內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉液），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

3.滴加適量試劑2（封閉用正常羊血清工作液），室溫孵育10分鐘，甩干。

4.滴加適量一抗工作液（商品化即用型抗體或適當(dāng)比例稀釋的濃縮抗體），按實(shí)驗(yàn)要求孵育，然后PBS充分淋洗。

5.滴加適量試劑3（生物素標(biāo)記羊抗鼠二抗工作液），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

6.滴加適量試劑4（HRP標(biāo)記的鏈霉親和素），室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗。

7.DAB顯色工作液配制：根據(jù)需要量，將試劑A和試劑B以1：19的體積比混勻后即為DAB顯色工作液。也可選擇每 毫升試劑B中滴加1滴（約50μl）試劑A，混勻即可。

8.顯色：加適量的DAB顯色工作液于需要顯色的組織切片或細(xì)胞爬片上即可顯色，顯色時(shí)間一般為1~5分鐘。顯微鏡下觀察控制顯色時(shí)間，當(dāng)達(dá)到最佳顯色效果后，自來(lái)水沖洗終止顯色。顯色后的切片經(jīng)復(fù)染、脫水透明，封片后可長(zhǎng)期保

 存。

 

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