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(1)將旋光儀接于220V交流電源。開啟電源開關，約5分鐘后鈉光燈發光正常，就可開始工作。
(2)檢查旋光儀零位是否準確，即在旋光儀未放試管或放進充滿蒸餾水的試管時，觀察零度時視場亮度是否一致。如不一致，說明有零位誤差，應在測量讀數中減去或加上該偏差值。或放松度盤蓋背面四只螺釘，微微轉動度盤蓋校正之(只能校正0.5°左右的誤 差，嚴重的應送制造廠檢修)。
(3)選取長度適宜的試管，注滿待測試液，裝上橡皮圈，旋上螺帽，直至不漏水為止。螺帽不宜旋得太緊，否則護片玻璃會引起應力，影響讀數正確性。然后將試管兩頭殘余溶液揩干，以免影響觀察清晰度及測定精度。
(4)測定旋光讀數:轉動度盤、檢偏鏡、在視場中覓得亮度一致的位置，再從度盤上讀數。讀數是正的為右旋物質，讀數是負的為左旋物質。
(5)采用雙游標讀數法可按下列公式求得結果Q=(A+B)/2
式中:A和B分別為兩游標窗讀數值。如果A=B，而且度盤轉到任意位置都符合等式，則說明旋光儀沒有偏心差(一般出廠前旋光儀均作過校正)，可以不用對項讀數法。
(6)旋光度和溫度也有關系。對大多數物質，用λ=5893A°(鈉光)測定，當溫度升高1℃時，旋光度約減少0.3%。對于要求較高的測定工作，能在20℃±2℃的條件下進行。
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