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同類(lèi)產(chǎn)品
土壤中微生物分離純化培養(yǎng)需要掌握的實(shí)驗(yàn)原理
實(shí)驗(yàn)一 常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類(lèi)和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用*泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱(chēng)為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的最基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。
干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。
三、試劑與器材
1.器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過(guò)濾器、鑷子等。
2.試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1.稱(chēng)量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查
2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查
4.過(guò)濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌
五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)
1.要嚴(yán)格按配方配制。
2.調(diào)pH不要過(guò)頭。
3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過(guò)緊，注意溫度的時(shí)間控制，70?C以下放物、取物。
4.高壓滅菌要注意物品不要過(guò)多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。
5.過(guò)濾除菌要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。
六、思考題
1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的?
2.在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題?為什么?
3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么?
4.培養(yǎng)基的配制原則是什么?
實(shí)驗(yàn)二
土壤中微生物分離純化培養(yǎng)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征；進(jìn)一步熟練和掌握微生物無(wú)菌操作技術(shù)；掌握微生物培養(yǎng)方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：?jiǎn)渭?xì)胞挑取法，稀釋涂布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線(xiàn)法 稀釋涂布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養(yǎng)－挑菌落；平板劃線(xiàn)法步驟：倒平板－標(biāo)記培養(yǎng)基名稱(chēng)－劃線(xiàn)。
三、試劑與器材
1.器材 盛9m1無(wú)菌水的試管、盛90m1無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無(wú)菌玻璃涂棒、無(wú)菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無(wú)菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。
2.試劑 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏1號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1.土壤稀釋液的制備
2.微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線(xiàn)分離法，微生物培養(yǎng)技術(shù)
五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)
1.掌握含菌培養(yǎng)基的配制，嚴(yán)格控制溫度。
2.平板劃線(xiàn)應(yīng)防止染菌，同時(shí)應(yīng)注意劃線(xiàn)深度及密度。
六、思考題
1.如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)?請(qǐng)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)的主要步驟。
2.如果要分離得到嗜鹽細(xì)菌，在什么地方取樣品為宜?并說(shuō)明理由。
實(shí)驗(yàn)三
菌種保藏
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.學(xué)習(xí)并掌握菌種保藏的基本原理。
2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
微生物個(gè)體微小、代謝旺盛、生長(zhǎng)繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法
三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌、青霉菌、放線(xiàn)菌
2.試劑 液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無(wú)水氯化鈣、食鹽、干冰
3.器材 無(wú)菌吸管、無(wú)菌滴管、無(wú)菌培養(yǎng)皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1.斜面保藏法
2.液體石蠟法
3.穿刺保藏法
4.砂土管保藏法
5.冷凍真空干燥保存法
五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)
1.清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)不同要求選擇適宜的保藏方法。
2.熔封安瓶時(shí)防止封閉不嚴(yán)。
3.液氮凍存操作應(yīng)防止凍傷。
六、思考題
根據(jù)你自己的實(shí)驗(yàn)。談?wù)?--2種菌種保藏方法的利弊?
實(shí)驗(yàn)四
細(xì)菌形態(tài)觀察及單染色
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.了解簡(jiǎn)單染色法的原理，并掌握其操作方法。
2.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。
3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。
4.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。
二、實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)菌個(gè)體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對(duì)比，以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌煞譃楹?jiǎn)單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡(jiǎn)單染色法是最基本的染色方法，是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色。
三、試劑與器材
1.材料 大腸桿菌，枯草芽孢桿菌
2.試劑 呂氏堿性美藍(lán)染液(或草酸銨結(jié)晶紫染液)、齊氏石炭酸復(fù)紅染液。
3.器材 顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
簡(jiǎn)單染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢
五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)
1.涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過(guò)多，涂片應(yīng)盡可能均勻，
2.水洗步驟水流不宜過(guò)大，過(guò)急，以免涂片薄膜脫落。
六、思考題
1.你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí)，尤其應(yīng)該注意哪些環(huán)幣?
2.為什么要求制片*干燥后才能用油鏡觀察?
3.如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題?如果加熱溫度過(guò)高、時(shí)間太長(zhǎng)，又會(huì)怎樣呢?
實(shí)驗(yàn)五
放線(xiàn)菌及霉菌形態(tài)觀察
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.了解放線(xiàn)菌、霉菌形態(tài)觀察的原理。
2.學(xué)習(xí)并掌握觀察放線(xiàn)菌、霉菌形態(tài)的操作方法。
3.初步了解放線(xiàn)菌、霉菌的形態(tài)特征。
二、實(shí)驗(yàn)原理
放線(xiàn)菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。常見(jiàn)放線(xiàn)菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱(chēng)“基絲”)，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱(chēng)“氣絲”)，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線(xiàn)菌只產(chǎn)生基絲而無(wú)氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類(lèi)的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。
霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類(lèi)霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線(xiàn)菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線(xiàn)菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實(shí)驗(yàn)采用插片法。
插片法：將放線(xiàn)菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線(xiàn)菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線(xiàn)菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。
三、試劑與器材
1.材料 黑曲霉、青霉和根霉，細(xì)黃
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