酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,簡稱NC膜),是蛋白印跡*泛使用的轉移介質,對蛋白有很強的結合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學發光(Luminol類)、常規顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高。在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,同時也是免疫反應的發生處。NC膜是生物學試驗中最重要的耗材之一。
NC膜的應用技巧:
1. 蛋白與膜的結合原理
蛋白與膜的結合原理, 已知的結合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等,確切的結合原理并不明確,主要靠假說來支撐。主要有兩種假說:
1)首先兩者靠靜電作用力結合,然后靠H鍵和疏水作用來維持長時間結合。
2)首先兩者靠疏水作用結合,然后靠靜電作用來維持長時間結合。
兩條假說,都表明其結合過程分為兩步,首先結合和后面長時間結合。由于結合原理的不明確性,導致在這方面的工作非常依賴實踐經驗。
2. 膜對結合的影響
1)膜孔徑
有些技術人員傾向使用膜孔徑來區分不同的膜,但是請注意這只僅僅限于同一廠家的產品,如果是不同廠家的產品,這種比較是無意義的。
膜孔徑與層析速度的關系,已在上文描述。隨著膜孔徑減小,膜的實際可用表面積遞增,膜結合蛋白的量也遞增。估量表面積的參數為表面積比率(實際可用表面積與所用膜平面積的比率)。另外,膜孔徑越小,層析速度也越小,那么金標復合物通過T線的時間也就越長,反應也就越充分。
綜合以上兩點,結論為膜孔徑越小靈敏度越高。但是同時也減慢了跑板速度,增加了非特異性結合的機會,也就是假陽性越高.所以要按照試驗結果挑選適合實際項目的膜,找到合適的平衡點。
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