酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,簡稱NC膜),是蛋白印跡*泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì),對蛋白有很強的結(jié)合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學發(fā)光(Luminol類)、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高。在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,同時也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。NC膜是生物學試驗中最重要的耗材之一。
NC膜的應(yīng)用技巧:
1. 蛋白與膜的結(jié)合原理
蛋白與膜的結(jié)合原理, 已知的結(jié)合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等,確切的結(jié)合原理并不明確,主要靠假說來支撐。主要有兩種假說:
1)首先兩者靠靜電作用力結(jié)合,然后靠H鍵和疏水作用來維持長時間結(jié)合。
2)首先兩者靠疏水作用結(jié)合,然后靠靜電作用來維持長時間結(jié)合。
兩條假說,都表明其結(jié)合過程分為兩步,首先結(jié)合和后面長時間結(jié)合。由于結(jié)合原理的不明確性,導(dǎo)致在這方面的工作非常依賴實踐經(jīng)驗。
2. 膜對結(jié)合的影響
1)膜孔徑
有些技術(shù)人員傾向使用膜孔徑來區(qū)分不同的膜,但是請注意這只僅僅限于同一廠家的產(chǎn)品,如果是不同廠家的產(chǎn)品,這種比較是無意義的。
膜孔徑與層析速度的關(guān)系,已在上文描述。隨著膜孔徑減小,膜的實際可用表面積遞增,膜結(jié)合蛋白的量也遞增。估量表面積的參數(shù)為表面積比率(實際可用表面積與所用膜平面積的比率)。另外,膜孔徑越小,層析速度也越小,那么金標復(fù)合物通過T線的時間也就越長,反應(yīng)也就越充分。
綜合以上兩點,結(jié)論為膜孔徑越小靈敏度越高。但是同時也減慢了跑板速度,增加了非特異性結(jié)合的機會,也就是假陽性越高.所以要按照試驗結(jié)果挑選適合實際項目的膜,找到合適的平衡點。
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