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菲恩生物預吸附二抗實驗原理

來源:武漢菲恩生物科技有限公司   2021年09月09日 09:13  

對于經常進行抗體檢測工作的人來說,非特異性結合和背景著色常常是一大困擾,某些情況下二抗存在交叉反應是主要原因。

二抗,即第二抗體,是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號。二抗的制備一般是利用抗體是大分子的蛋白質具有抗原性的性質,去免疫異種動物,由異種動物的免疫系統產生的針對于此抗體的免疫球蛋白。因此二抗實際上也是多抗,本身的特性決定了其大概率會存在交叉反應。

針對這一問題,我們可以在制備二抗時添加一步預吸附的純化步驟,以提高抗體的特異性。基本原理是將二抗流經固定有潛在交叉反應的物種的血清蛋白的基質柱,有非特異性結合的二抗會留在柱中,而特異性高的二抗將通過基質柱。

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經過預吸附處理的二抗能有效降低非特異性背景,尤其在多重染色實驗和樣本中內源性免疫球蛋白(Igs)含量高的IHC實驗時效果更好。

多重染色實驗時,由于同時使用多個一抗和對應的二抗,每種二抗有和其他一抗之間交叉反應的風險。例如同時使用兔抗和小鼠抗進行雙染實驗時,應使用針對小鼠血清預吸附的抗兔二抗,和針對兔血清預吸附的抗小鼠二抗。

而IHC實驗中如果所用樣本中內源性免疫球蛋白(Igs)含量高,二抗也有與樣本本身免疫球蛋白交叉反應的風險。如對人組織樣本進行染色時,應使用對人血清預吸附的HRP二抗。

菲恩生物提供的抗體種類廣泛,涵蓋了腫瘤、神經生物學、肝細胞、信號傳道、表觀遺傳學、心血管生物學、免疫學、代謝、細胞生物學等研究領域,還包括單克隆抗體、多克隆抗體、標記的抗體和未標記的抗體。其中多克隆抗體是經過抗原親和純化的特異性IgG。菲恩生物提供10,000多種抗體產品,可用于大多數動物物種。


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