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分光光度法是指應(yīng)用721光度計的分析方法，具有靈敏、準(zhǔn)確、快速及選擇性好等特點(diǎn)。通常所測樣品溶液濃度下限可達(dá)10-6~10-5mol/L，適用于測定食品中的微量組分（如肉制品中的亞硫酸鹽、糖果中的二氧化硫等）。光度計長時間不用時，暗箱里通常需要放置干燥器，用于保持暗箱室內(nèi)的空氣干燥。如果在預(yù)熱時將暗箱蓋打開，會使其空氣濕度發(fā)生變化，影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。
721光度計的測量條件選擇說明：
一、顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇
進(jìn)行比色分析或光度分析時，首先要把待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物，然后進(jìn)行比色或光度測定。將待測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)，與待測組分形成有色化合物的試劑稱為顯色劑。
1.顯色反應(yīng)的選擇
顯色反應(yīng)分絡(luò)合反應(yīng)和氧化還原反應(yīng)兩類，絡(luò)合反應(yīng)是最主要的顯色反應(yīng)。選用的原則是：
①選擇靈敏的顯色反應(yīng)。摩爾吸光系數(shù)ε的大小是顯色反應(yīng)靈敏度高低的重要標(biāo)志，因此應(yīng)當(dāng)選擇生成的有色物質(zhì)的ε較大的顯色反應(yīng)。一般來說，當(dāng)ε為104-105時，可認(rèn)為該反應(yīng)靈敏度較高；
②盡可能選擇選擇性好的顯色劑。即顯色劑僅與一個組分或少數(shù)幾個組分發(fā)生顯色反應(yīng)；
③顯色劑在測定波長處無明顯吸收。通常把兩種有色物質(zhì)最大吸收波長之差稱為對比度，一般要求顯色劑與有色化合物的對比度在60nm以上；
④反應(yīng)生成的有色化合物組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
2.顯色條件的選擇
吸光光度法測定的是顯色反應(yīng)達(dá)到平衡后溶液的吸光度，因此要得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須從研究平衡著手，了解影響顯色反應(yīng)的因素，控制適當(dāng)?shù)臈l件，使顯色反應(yīng)*和穩(wěn)定。
①根據(jù)溶液平衡原理，有色絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)越大，顯色劑過量越多，越有利于待測組分形成有色絡(luò)合物。但是過量顯色劑的加入有時會引起副反應(yīng)，對測定反而不利；
②酸度對顯色反應(yīng)的影響是多方面的。一種金屬離子與某種顯色劑反應(yīng)的適宜酸度范圍是通過實(shí)驗(yàn)來確定的。確定的方法是固定待測組分及顯色劑的濃度，改變?nèi)芤簆H值，測定其吸光度，作出吸光度-pH值關(guān)系曲線，選擇曲線平坦部分對應(yīng)的pH值作為測定條件；
③顯色反應(yīng)一般在室溫下進(jìn)行，有的反應(yīng)需要加熱，以加速顯色反應(yīng)，使之進(jìn)行*；
④大多數(shù)顯色反應(yīng)需要經(jīng)過一定的時間才能完成，其長短與溫度的高低有關(guān)，也會受到空氣的氧化或發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)使眼色顏色減弱。因此必須通過實(shí)驗(yàn)作出在一定溫度下的吸光度-時間關(guān)系曲線，得到適宜的顯色時間。
三、干擾的消除
1.干擾的類型光度分析中，共存離子如本身有顏色，或與顯色劑作用生成有色化合物，都將干擾測定。
①干擾離子本身有顏色；
②干擾離子本身無顏色，但能與顯色劑反應(yīng)生成穩(wěn)定的配合物。若生成的配合物有色則直接干擾測定，若生成的配合物無色，也降低了顯色劑的濃度，影響被測離子與顯色劑的反應(yīng)，而產(chǎn)生誤差；
③干擾離子與被測離子反應(yīng)生成配合物或沉淀，影響被測離子的測定。
2.消除干擾的方法
①控制溶液酸度；
②加入掩蔽劑與干擾離子形成更穩(wěn)定的化合物，使干擾離子不再產(chǎn)生干擾；
③里用參比溶液消除某些有色干擾離子的影響；
④選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞑ㄩL以消除干擾；
⑤采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法。
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